血清小胞外囊泡miRNA的PCR内参及制备方法

    公开(公告)号:CN117448319B

    公开(公告)日:2025-05-23

    申请号:CN202210879454.5

    申请日:2022-07-25

    Abstract: 本发明提出了一种血清小胞外囊泡miRNA的PCR内参及制备方法,属于基因工程技术领域。所述内参选自miR‑30e‑5p、miR‑361‑3p、miR‑93‑5p、miR‑181a‑5p、miR‑425‑5p和miR‑186‑5p中任一种或其组合;所述miR‑30e‑5p的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明对良、恶性卵巢肿瘤患者血清小胞外囊泡miRNA表达进行定量,筛选不同个体之间的表达最为稳定的miRNA作为候选内参或内参组合,应用实时荧光定量PCR技术在另一独立的卵巢肿瘤患者群体对筛选出的候选内参/内参组合进行稳定性验证。

    一种检测低丰度miRNA的方法及检测试剂盒

    公开(公告)号:CN118547059A

    公开(公告)日:2024-08-27

    申请号:CN202310167787.X

    申请日:2023-02-27

    Abstract: 本发明提供一种检测低丰度miRNA的方法及检测试剂盒。所述检测方法为:在miRNA的3’端加poly(A)序列、5’端加接头AP序列;对两端加接头的miRNA进行逆转录反应,逆转录的引物为RT序列;针对miRNA的两端接头序列设计正反向预扩增引物,进行预扩增反应;然后以预扩增产物为模板,针对待测miRNA的核苷酸序列设计引物,进行PCR检测。本发明提供的检测方法可实现低丰度miRNA的检测,减少样本投入,同时提高了miRNA检测的灵敏度和扩增效率。本发明方法用于外泌体miRNA检测时,极低丰度的miRNA也能够检测到。

    一种外泌体总RNA的提取方法
    4.
    发明公开

    公开(公告)号:CN117844798A

    公开(公告)日:2024-04-09

    申请号:CN202211208279.3

    申请日:2022-09-30

    Abstract: 本发明公开了一种外泌体总RNA的提取方法。该方法为:步骤1,向重悬的外泌体中加入QIAzol混匀,室温孵育4‑6min,加入氯仿混匀,其中氯仿和QIAzol的体积比为(0.15‑0.25):1,室温孵育3‑5min;离心,将上层水相转移到新的离心管中,加入1.4‑1.6倍体积的酒精,充分混匀;步骤2,吸取混匀液到离心柱中,离心,直到所有混匀液通过离心柱;步骤3,加入BufferRWT,离心,加入RPE,其中RPE和BufferRWT的体积比为(0.5‑1):1,离心,弃离心废液;步骤4,加入78‑85%酒精,离心,弃离心废液,将离心柱转入新的收集管中,离心;将离心柱转入新的离心管中,向离心柱膜加入无酶水,孵育1‑2min,离心1‑2min,收集RNA样本。本发明提供的方法用于外泌体RNA提取时具有更好的提取效果。

    一种低丰度lncRNA的RT-qPCR检测方法
    5.
    发明公开

    公开(公告)号:CN117721186A

    公开(公告)日:2024-03-19

    申请号:CN202211126237.5

    申请日:2022-09-16

    Abstract: 本发明公开了一种低丰度lncRNA的RT‑qPCR检测方法。该方法为:在待检样本RNA的两端加入接头序列,其中3'端接头序列含有随机6碱基序列,5'端通过T4RNA连接酶或者SMARTScribeTM逆转录酶加上接头序列;然后进行反转录,反转录的双链cDNA模板进行PCR预扩增,预扩增产物再进行RT‑qPCR检测。本发明对常规RT‑qPCR技术进行改进,使得血浆小型胞外囊泡低丰度的lncRNA能够被检测出来,不仅降低了临床医疗生物样本收集难度,也减少患者额外的痛苦,为血浆小型胞外囊泡lncRNA在临床诊断、转化医学研究等方面的应用奠定坚实的基础。

    外泌体miRNA标志物在肺癌患者靶向治疗预后评估中的应用

    公开(公告)号:CN118581216A

    公开(公告)日:2024-09-03

    申请号:CN202310190055.2

    申请日:2023-03-02

    Abstract: 本发明提供一种外泌体miRNA标志物在制备肺癌患者靶向治疗预后评估产品中的应用,所述标志物选自miR‑30a‑3p、miR‑10b‑5p、miR‑150‑5p和miR‑122‑5p中的至少一种。本发明系首次发现可以用于肺癌靶向治疗方案精准筛选和鉴别获益肺癌人群的生物标志物。本发明肺癌患者血浆外泌体来源的miR‑30a‑3p、miR‑10b‑5p、miR‑150‑5p和miR‑122‑5p作为靶向治疗方案获益人群筛选具有较高的灵敏度以及便捷性。本发明采用的液体活检鉴别技术可以结合影像学检查来提高靶向治疗方案响应人群鉴别的特异性,降低假阳性,避免医疗过度,避免医疗资源浪费,精准筛选靶向治疗获益患者人群。

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