公开(公告)号：CN105907716A

公开(公告)日：2016-08-31

申请号：CN201610296462.1

申请日：2016-05-06

Applicant: 上海市第一人民医院

Inventor： 王刚阳 ,  沈尊理 ,  蔡郑东 ,  华莹奇 ,  马政文 ,  金羽青 ,  沈华 ,  曹玲玲

IPC: C12N5/079

CPC classification number: C12N5/0622

Abstract: 本发明涉及细胞生物学领域，公开了一种从成年猕猴周围神经中分离、纯化雪旺细胞的方法，包括下述步骤：第一步，神经的获取及体外预变性：无菌情况下取成年猕猴腓肠和腓总神经段，去除神经外膜，采用含有复合因子的SCCM预变培养基培养获得成年猕猴腓肠神经；第二步，细胞的原代培养：NB4和dispase混合消化神经，离心后，重悬于含有SCCM的laminin的培养皿中，孵育；第三步，雪旺细胞的纯化：将细胞孵育后，加入dispase消化后收集细胞悬液，在含有Ara?C纯化培养液进行孵育；然后纯化、离心后种植在含有SCCM的生长培养基中。预变性时加入细胞增殖因子提高细胞产量，缩短纯化时间，获得高纯度的成年动物雪旺细胞。

公开(公告)号：CN102021144A

公开(公告)日：2011-04-20

申请号：CN200910195922.1

申请日：2009-09-18

Applicant: 上海市第一人民医院

Inventor： 祝加学 ,  沈尊理 ,  秦金保 ,  沈华 ,  张兆峰

IPC: C12N5/08

Abstract: 本发明属于细胞生物学领域，涉及一种快速充分获得脐带间充质干细胞的方法。本发明将在无菌情况下获得的脐带去除动、静脉，制成组织碎块，再加入含有青霉素和链霉素的磷酸盐缓冲液清洗，离心弃上清；随后用胶原酶NB4和透明质酸酶消化脐带碎块，并在乙二胺四乙酸磷酸盐溶液中置于摇床振荡；用100-200目滤网过滤，收集滤过液；最后以600g离心5-10分钟，弃去上清液，用DMEM培养基清洗2-3次，即获得脐带间充质干细胞。本发明可以在短时间内获得大量脐带间充质干细胞。且经过实验证实，获得的脐带干细胞表达干细胞的特异性标记，能够向脂肪、骨、软骨等诱导分化。

公开(公告)号：CN102021141A

公开(公告)日：2011-04-20

申请号：CN200910195924.0

申请日：2009-09-18

Applicant: 上海市第一人民医院

Inventor： 祝加学 ,  沈尊理 ,  秦金保 ,  沈华 ,  张兆峰

IPC: C12N5/06

Abstract: 本发明属于细胞生物学领域，涉及一种利用胶原酶和酵素酶分离、纯化许旺细胞的方法及其应用。首先，在无菌情况下剥离神经段的神经外膜，切碎、清洗，离心弃上清；然后用酵素酶、胶原酶NB4或者两者的混合液消化神经碎块30～60分钟，反复吹打，然后离心、弃上清，得到细胞团块；最后用许旺细胞培养液重悬，即可。本发明使用复合胶原酶和酵素酶分离纯化许旺细胞，经过第一次纯化后，许旺细胞的纯度就可达到98％。再次纯化扩增后，许旺细胞的纯度就可以接近100％。利用本发明能够低成本、高效率的获得大量高纯度的许旺细胞，为损伤神经修复提供丰富优质许旺细胞。

公开(公告)号：CN102021140A

公开(公告)日：2011-04-20

申请号：CN200910195923.6

申请日：2009-09-18

Applicant: 上海市第一人民医院

Inventor： 祝加学 ,  沈尊理 ,  秦金保 ,  沈华 ,  张兆峰

IPC: C12N5/06

Abstract: 本发明属于细胞生物学领域，涉及一种分离、纯化许旺细胞的方法。该方法依次由下述步骤组成：首先，无菌情况下取神经段，去除神经外膜；然后用复合胶原酶NB4和dispase混合消化酶溶液消化神经束，弃溶液；再置于胰蛋白酶和EDTA中作用5～10分钟，得到去除神经束膜的神经纤维；随后将得到的神经纤维置于混合酶溶液中，振荡得到细胞混悬液；最后离心，重悬。利用本发明能够低成本、高效率的获得大量高纯度的许旺细胞，为损伤神经修复提供丰富优质许旺细胞。

公开(公告)号：CN109957541A

公开(公告)日：2019-07-02

申请号：CN201711412252.5

申请日：2017-12-23

Applicant: 上海市第一人民医院

Inventor： 王洋 ,  金羽青 ,  沈华 ,  沈尊理

IPC: C12N5/077 ,  C12N5/079 ,  A61L27/38

Abstract: 本发明属于生物学领域/组织工程，涉及一种组织工程神经种子细胞的构建方法及用途。本发明利用Dispase II分离纯化许旺细胞以及成纤维细胞，将构建的种子细胞用于构建组织工程神经，置入神经导管复合成神经移植物，进一步用于神经缺损的修复，本发明提供了一种获取相对简单，效果良好的种子细胞的方法，外周神经成纤维细胞取材容易，体外扩增能力强，与许旺细胞联合使用移植后具有良好的促进神经再生的效果，并且明显减少的许旺细胞的用量；修复后再生的神经直径较粗，无神经瘤形成；本方法尤其适用于组织工程神经生物材料中添加的种子细胞，具有应用前景和市场价值。

公开(公告)号：CN102021140B

公开(公告)日：2013-04-24

申请号：CN200910195923.6

申请日：2009-09-18

Applicant: 上海市第一人民医院

Inventor： 祝加学 ,  沈尊理 ,  秦金保 ,  沈华 ,  张兆峰

IPC: C12N5/06

Abstract: 本发明属于细胞生物学领域，涉及一种分离、纯化许旺细胞的方法。该方法依次由下述步骤组成：首先，无菌情况下取神经段，去除神经外膜；然后用复合胶原酶NB4和dispase混合消化酶溶液消化神经束，弃溶液；再置于胰蛋白酶和EDTA中作用5～10分钟，得到去除神经束膜的神经纤维；随后将得到的神经纤维置于混合酶溶液中，振荡得到细胞混悬液；最后离心，重悬。利用本发明能够低成本、高效率的获得大量高纯度的许旺细胞，为损伤神经修复提供丰富优质许旺细胞。