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公开(公告)号：CN102021144A
公开(公告)日：2011-04-20
申请号：CN200910195922.1
申请日：2009-09-18
Applicant: 上海市第一人民医院
IPC: C12N5/08
Abstract: 本发明属于细胞生物学领域，涉及一种快速充分获得脐带间充质干细胞的方法。本发明将在无菌情况下获得的脐带去除动、静脉，制成组织碎块，再加入含有青霉素和链霉素的磷酸盐缓冲液清洗，离心弃上清；随后用胶原酶NB4和透明质酸酶消化脐带碎块，并在乙二胺四乙酸磷酸盐溶液中置于摇床振荡；用100-200目滤网过滤，收集滤过液；最后以600g离心5-10分钟，弃去上清液，用DMEM培养基清洗2-3次，即获得脐带间充质干细胞。本发明可以在短时间内获得大量脐带间充质干细胞。且经过实验证实，获得的脐带干细胞表达干细胞的特异性标记，能够向脂肪、骨、软骨等诱导分化。
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公开(公告)号：CN102021141A
公开(公告)日：2011-04-20
申请号：CN200910195924.0
申请日：2009-09-18
Applicant: 上海市第一人民医院
IPC: C12N5/06
Abstract: 本发明属于细胞生物学领域，涉及一种利用胶原酶和酵素酶分离、纯化许旺细胞的方法及其应用。首先，在无菌情况下剥离神经段的神经外膜，切碎、清洗，离心弃上清；然后用酵素酶、胶原酶NB4或者两者的混合液消化神经碎块30～60分钟，反复吹打，然后离心、弃上清，得到细胞团块；最后用许旺细胞培养液重悬，即可。本发明使用复合胶原酶和酵素酶分离纯化许旺细胞，经过第一次纯化后，许旺细胞的纯度就可达到98％。再次纯化扩增后，许旺细胞的纯度就可以接近100％。利用本发明能够低成本、高效率的获得大量高纯度的许旺细胞，为损伤神经修复提供丰富优质许旺细胞。
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公开(公告)号：CN102021140A
公开(公告)日：2011-04-20
申请号：CN200910195923.6
申请日：2009-09-18
Applicant: 上海市第一人民医院
IPC: C12N5/06
Abstract: 本发明属于细胞生物学领域，涉及一种分离、纯化许旺细胞的方法。该方法依次由下述步骤组成：首先，无菌情况下取神经段，去除神经外膜；然后用复合胶原酶NB4和dispase混合消化酶溶液消化神经束，弃溶液；再置于胰蛋白酶和EDTA中作用5～10分钟，得到去除神经束膜的神经纤维；随后将得到的神经纤维置于混合酶溶液中，振荡得到细胞混悬液；最后离心，重悬。利用本发明能够低成本、高效率的获得大量高纯度的许旺细胞，为损伤神经修复提供丰富优质许旺细胞。
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公开(公告)号：CN102021140B
公开(公告)日：2013-04-24
申请号：CN200910195923.6
申请日：2009-09-18
Applicant: 上海市第一人民医院
IPC: C12N5/06
Abstract: 本发明属于细胞生物学领域，涉及一种分离、纯化许旺细胞的方法。该方法依次由下述步骤组成：首先，无菌情况下取神经段，去除神经外膜；然后用复合胶原酶NB4和dispase混合消化酶溶液消化神经束，弃溶液；再置于胰蛋白酶和EDTA中作用5～10分钟，得到去除神经束膜的神经纤维；随后将得到的神经纤维置于混合酶溶液中，振荡得到细胞混悬液；最后离心，重悬。利用本发明能够低成本、高效率的获得大量高纯度的许旺细胞，为损伤神经修复提供丰富优质许旺细胞。
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