公开(公告)号：CN104498419A

公开(公告)日：2015-04-08

申请号：CN201410705878.5

申请日：2014-11-27

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 周培 ,  冯海玮 ,  王大欣 ,  俞明磊 ,  毛亮 ,  唐冬

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12P13/14 ,  C12R1/19

CPC classification number: C12N9/0016 ,  C12P13/14 ,  C12Y104/01002

Abstract: 一种灰略红链霉菌(Streptomyces griseorubens)胞内谷氨酸脱氢酶编码基因及其应用。通过将该谷氨酸脱氢酶编码基因构建到表达载体上，并将该重组表达载体导入大肠杆菌进而得到可发酵合成谷氨酸脱氢酶的转基因重组大肠杆菌。本发明克服现有技术中由于谷氨酸脱氢酶多为胞内表达且表达量较低导致的应用范围和效果严重受限等不足，应用基因工程手段实现其体外的大量表达合成。此外，本发明通过在重组蛋白添加聚组氨酸标签的方法，方便了后期蛋白的纯化。本发明可为谷氨酸脱氢酶的规模化发酵生产提供一种新方法。

公开(公告)号：CN104120103A

公开(公告)日：2014-10-29

申请号：CN201410373726.X

申请日：2014-07-31

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 周培 ,  冯海玮 ,  孙玉静 ,  支月娥 ,  毛亮 ,  唐冬 ,  卫星 ,  罗艳青

IPC: C12N1/21 ,  C12N9/10 ,  C12N15/70 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域的谷氨酸合酶的工程菌及其实现方法，以灰略红链霉菌基因组DNA为模板，与含有酶切位点的引物进行PCR扩增依次得到编码谷氨酸合酶小亚基及大亚基的核苷酸序列；然后将扩增得到的基因序列依次连接到共表达载体pETDuet‐1，最终获得重组共表达载体pETDuet‐GG‐GF；之后将该谷氨酸合酶表达载体转化到大肠杆菌表达菌株。本发明针对现有技术存在的由于谷氨酸合酶在生物体内多为胞内酶且表达量较低导致的应用范围和效果严重受限等不足，应用基因工程手段实现其体外的大量表达合成，此外本发明通过在重组蛋白添加聚组氨酸标签的方法，方便了后期蛋白的纯化。

公开(公告)号：CN103555623A

公开(公告)日：2014-02-05

申请号：CN201310512364.3

申请日：2013-10-25

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 周培 ,  冯海玮 ,  支月娥 ,  罗艳青 ,  毛亮 ,  孙玉静 ,  唐冬 ,  卫星 ,  时唯伟

IPC: C12N1/20 ,  A01N63/00 ,  A01P3/00 ,  C12R1/465

Abstract: 一种土壤修复技术领域的秸秆降解生防链霉菌及其应用，包括：菌种保藏和菌种活化，其中：菌种保藏采用-20℃低温冷冻保藏法，是微生物孢子处于较低的温度下，以降低其代谢速度从而达到保藏菌种的目的；菌种活化将冷冻保藏状态的菌种接种到YEME液体培养基中，待菌种逐渐适应培养环境进行繁殖，以获得数量足够、活力旺盛的培养物。另外，本发明涉及将链霉菌JSD-1用于生物防治。本发明利用已知的JSD-1菌株所未公开的硝态氮降解转化能力、以及对高温(如70℃)和高浓度硝酸盐(3%)有很强的耐受性，对植物病原(如番茄灰霉病和水稻恶苗病)微生物具有很好的抑制作用等特性，实现秸秆中的“难利用的碳”与设施次生盐渍化土壤中“过量的氮”的原位降解，并在高温堆肥外接菌剂和生物肥料的研制上有很好的应用潜力。

公开(公告)号：CN104152393A

公开(公告)日：2014-11-19

申请号：CN201410374669.7

申请日：2014-07-31

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 周培 ,  冯海玮 ,  支月娥 ,  唐冬 ,  孙玉静 ,  毛亮 ,  罗艳青 ,  卫星

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N9/06 ,  C12R1/19 ,  C12R1/465

CPC classification number: Y02A40/12

Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域的亚硝酸盐还原酶的工程菌及其实现方法，以灰略红链霉菌基因组DNA为模板，与含有酶切位点的引物进行PCR扩增依次得到编码亚硝酸盐还原酶大亚基及亚硝酸盐还原酶小亚基的核苷酸序列；然后将扩增得到的基因序列依次连接到共表达载体pETDuet‐1，最终获得重组共表达载体pETDuet‐NC‐ND；之后将该亚硝酸盐还原酶表达载体转化到大肠杆菌表达菌株。本发明针对现有技术存在的由于亚硝酸盐还原酶在生物体内多为胞内酶且表达量较低导致的应用范围和效果严重受限等不足，能够应用基因工程手段实现亚硝酸盐还原酶体外的大量表达合成，对于次生盐渍化土壤的快速修复乃至实现精准农业具有重大意义。

公开(公告)号：CN104140944A

公开(公告)日：2014-11-12

申请号：CN201410373906.8

申请日：2014-07-31

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 周培 ,  冯海玮 ,  孙玉静 ,  支月娥 ,  唐冬 ,  卫星 ,  罗艳青 ,  毛亮

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N9/06 ,  C12R1/19 ,  C12R1/465

CPC classification number: Y02A40/12

Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域的硝酸盐还原酶的工程菌及其实现方法，以灰略红链霉菌基因组DNA为模板，与含有酶切位点的引物进行PCR扩增依次得到编码硝酸盐还原酶催化亚基及电子转移亚基的核苷酸序列；然后将扩增得到的基因序列依次连接到共表达载体pETDuet‐1，最终获得重组共表达载体pETDuet‐NB‐NA；之后将该硝酸盐还原酶表达载体转化到大肠杆菌表达菌株。本发明针对现有技术存在的由于硝酸盐还原酶在生物体内多为胞内酶且表达量较低导致的应用范围和效果严重受限等不足，应用基因工程手段实现硝酸盐还原酶体外的大量表达合成，对于次生盐渍化土壤的快速修复乃至实现精准农业具有重大意义。

公开(公告)号：CN103525739A

公开(公告)日：2014-01-22

申请号：CN201310512371.3

申请日：2013-10-25

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 周培 ,  冯海玮 ,  支月娥 ,  时唯伟 ,  卫星 ,  毛亮 ,  孙玉静 ,  罗艳青 ,  唐冬

IPC: C12N1/20 ,  B09C1/10 ,  C12R1/11

Abstract: 一种土壤修复技术领域的硝酸盐同化细菌及其在修复设施次生盐渍化土壤中的应用，通过硝酸盐同化细菌NCT-2以土壤中硝态氮作为氮源，并将其同化为其它形态的无机氮或细胞组分，从而实现对硝态氮的降解转化、降低土壤中硝态氮含量并对土壤进行修复。该硝酸盐同化细菌NCT-2为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)，该硝酸盐同化细菌NCT-2保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC No.4698。本发明对环境中硝态氮有很强的同化转化能力，对环境适应性强；此外，还具有溶磷能力。因此该菌在修复设施栽培次生盐渍化土壤和制备微生物肥料上有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN104140945A

公开(公告)日：2014-11-12

申请号：CN201410374683.7

申请日：2014-07-31

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 周培 ,  冯海玮 ,  孙玉静 ,  毛亮 ,  支月娥 ,  唐冬 ,  卫星 ,  罗艳青

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12P13/14 ,  C12R1/19 ,  C12R1/465

Abstract: 一种基因工程技术领域的基于谷氨酰胺合成酶的工程菌及其实现方法，以灰略红链霉菌基因组DNA为模板，与含有酶切位点的引物进行PCR扩增得到谷氨酰胺合成酶编码基因；然后将该基因插入大肠杆菌表达载体pET‐22b(+)中得到含有谷氨酰胺合成酶编码基因的重组表达载体；再将重组表达载体导入大肠杆菌表达菌株，筛选得到谷氨酰胺合成酶的工程菌。本发明针对现有技术存在的由于谷氨酰胺合成酶在生物体内多为胞内酶且表达量较低导致的应用范围和效果严重受限等不足，应用基因工程手段实现其体外的大量表达合成。