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    一种特异识别AAV9衣壳蛋白的多克隆抗体及制备方法
    1.
    发明公开
    一种特异识别AAV9衣壳蛋白的多克隆抗体及制备方法 有权

    公开(公告)号：CN114685651A

    公开(公告)日：2022-07-01

    申请号：CN202210396426.8

    申请日：2022-04-15

    Applicant: 三峡大学

    Inventor： 吕亚丰 ,  曹春雨 ,  李舒月 ,  张浩 ,  秦宇 ,  杨建林 ,  王静

    IPC: C07K16/08 ,  C07K16/06 ,  C12N15/70 ,  C12N15/35 ,  G01N33/569

    Abstract: 本发明提供一种特异识别AAV9衣壳蛋白的多克隆抗体及制备方法，将8处AAV9衣壳可变区氨基酸序列依次连接即为本发明所指AAV9可变区VR的氨基酸序列SEQ ID NO.1，由氨基酸序列得到编码AAV9衣壳可变区的DNA序列如SEQ ID NO.2，将DNA序列插入到原核表达载体pET30a获得质粒pET30a‑AAV‑VR，转化大肠杆菌扩增，采用IPTG诱导表达多价抗原肽，在变性条件下经Ni‑NTA树脂进行纯化，然后透析复性，纯化得到AAV9可变区蛋白免疫日本大耳朵白兔，以此制备多克隆抗体，ELISA检测抗体效价，Western‑blot及细胞免疫荧光检测抗体的应用。抗体效价为1:10240000，该抗体能特异性识别AAV9衣壳蛋白序列。为后续AAV载体开发以及AAV生物学功能研究奠定了基础。

    一种用于神经系统药物递送的AAV病毒载体
    2.
    发明公开
    一种用于神经系统药物递送的AAV病毒载体 审中-实审

    公开(公告)号：CN114606264A

    公开(公告)日：2022-06-10

    申请号：CN202210283090.4

    申请日：2022-03-22

    Applicant: 三峡大学

    Inventor： 吕亚丰 ,  曹春雨 ,  田国帅 ,  秦宇

    IPC: C12N15/864 ,  C07K14/015 ,  A61K48/00 ,  A61P25/00 ,  A61P25/14 ,  A61P25/16 ,  A61P25/28

    Abstract: 本发明涉及一种新型AAV载体，该病毒载体包含对应于AAV9的第588位氨基酸位点插入多肽序列WPTSYDA，同时存在H527突变为Y，R533氨基酸突变为S，另外用于表达目的基因的启动子为hSyn，与野生型AAV9载体相比，该AAV9.7YS突变体具有更好的穿透血脑屏障能力，静脉注射该病毒后感染神经系统的能力更强，而对外周组织（心脏、肝脏、骨骼肌）的感染效率更低。本发明还涉及公开的病毒载体的包装制备方法以及在基因治疗中的用途。

    一种特异识别AAV9衣壳蛋白的多克隆抗体及制备方法
    3.
    发明授权
    一种特异识别AAV9衣壳蛋白的多克隆抗体及制备方法 有权

    公开(公告)号：CN114685651B

    公开(公告)日：2023-07-11

    申请号：CN202210396426.8

    申请日：2022-04-15

    Applicant: 三峡大学

    Inventor： 吕亚丰 ,  曹春雨 ,  李舒月 ,  张浩 ,  秦宇 ,  杨建林 ,  王静

    IPC: C07K16/08 ,  C07K16/06 ,  C12N15/70 ,  C12N15/35 ,  G01N33/569

    Abstract: 本发明提供一种特异识别AAV9衣壳蛋白的多克隆抗体及制备方法，将8处AAV9衣壳可变区氨基酸序列依次连接即为本发明所指AAV9可变区VR的氨基酸序列SEQ ID NO.1，由氨基酸序列得到编码AAV9衣壳可变区的DNA序列如SEQ ID NO.2，将DNA序列插入到原核表达载体pET30a获得质粒pET30a‑AAV‑VR，转化大肠杆菌扩增，采用IPTG诱导表达多价抗原肽，在变性条件下经Ni‑NTA树脂进行纯化，然后透析复性，纯化得到AAV9可变区蛋白免疫日本大耳朵白兔，以此制备多克隆抗体，ELISA检测抗体效价，Western‑blot及细胞免疫荧光检测抗体的应用。抗体效价为1:10240000，该抗体能特异性识别AAV9衣壳蛋白序列。为后续AAV载体开发以及AAV生物学功能研究奠定了基础。

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