公开(公告)号：CN118562799A

公开(公告)日：2024-08-30

申请号：CN202410731422.X

申请日：2024-06-06

Applicant: 三峡大学

Inventor： 吕亚丰 ,  王静 ,  熊焱强 ,  曹春雨 ,  汪伟 ,  袁程 ,  孙文政

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/864 ,  A61K48/00 ,  A61P25/02

Abstract: 本发明公开了一种GALC基因截短型启动子、病毒载体及其应用，通过对GALC基因转录起始位点上游2kb序列进行转录因子结合分析，选择了三个GALC截短型启动子区域，分别为GALC‑114，GALC‑1269和GALC‑1800，克隆这3个启动子区域并构建重组AAV病毒载体，通过分析检测和筛选得到含有GALC‑1269的重组AAV病毒载体具有较高的表达量及特异性；然后将病毒载体中的LUC基因替换为GALC编码序列，包装得到重组病毒，该病毒注射到Twitcher模型小鼠中显著提高了小鼠的存活率、抓力等。本发明提供了一种GALC基因截短型启动子，还提供了一种制备治疗球形细胞脑蛋白质营养不良疾病的药物。

公开(公告)号：CN113999861B

公开(公告)日：2024-03-15

申请号：CN202111050778.X

申请日：2021-09-08

Applicant: 三峡大学

Inventor： 吕亚丰 ,  曹春雨 ,  杨建林 ,  李舒月 ,  张浩

IPC: C12N15/35 ,  C12N15/70 ,  C07K14/015 ,  C07K16/08 ,  C07K16/06 ,  C07K1/22 ,  G01N33/569

Abstract: 本发明提供一种腺相关病毒衣壳蛋白保守区多克隆抗体的制备方法及应用，通过DNAMAN软件分析，将AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10衣壳蛋白氨基酸序列中连续7个及以上氨基酸同源的序列依次拼接，获得的序列即为AAV衣壳蛋白保守区序列，与保守区氨基酸序列对应可确定编码衣壳蛋白保守区的DNA序列，根据宿主菌的特性，对获得的DNA序列进行密码子优化，将优化后的DNA序列合成并构建到pET‑30a原核表达载体，得到pET‑30a‑AAV‑RC保守区蛋白质粒，DNA序列如SEQ ID NO.1，氨基酸序列如SEQ ID NO.2。成功制备了抗AAV衣壳保守区蛋白的多克隆抗体，识别所有血清型AAV，特异性识别和结合人真核细胞中转染表达的AAV衣壳蛋白。

公开(公告)号：CN114685651A

公开(公告)日：2022-07-01

申请号：CN202210396426.8

申请日：2022-04-15

Applicant: 三峡大学

Inventor： 吕亚丰 ,  曹春雨 ,  李舒月 ,  张浩 ,  秦宇 ,  杨建林 ,  王静

IPC: C07K16/08 ,  C07K16/06 ,  C12N15/70 ,  C12N15/35 ,  G01N33/569

Abstract: 本发明提供一种特异识别AAV9衣壳蛋白的多克隆抗体及制备方法，将8处AAV9衣壳可变区氨基酸序列依次连接即为本发明所指AAV9可变区VR的氨基酸序列SEQ ID NO.1，由氨基酸序列得到编码AAV9衣壳可变区的DNA序列如SEQ ID NO.2，将DNA序列插入到原核表达载体pET30a获得质粒pET30a‑AAV‑VR，转化大肠杆菌扩增，采用IPTG诱导表达多价抗原肽，在变性条件下经Ni‑NTA树脂进行纯化，然后透析复性，纯化得到AAV9可变区蛋白免疫日本大耳朵白兔，以此制备多克隆抗体，ELISA检测抗体效价，Western‑blot及细胞免疫荧光检测抗体的应用。抗体效价为1:10240000，该抗体能特异性识别AAV9衣壳蛋白序列。为后续AAV载体开发以及AAV生物学功能研究奠定了基础。

公开(公告)号：CN118389554A

公开(公告)日：2024-07-26

申请号：CN202410577639.X

申请日：2024-05-10

Applicant: 三峡大学

Inventor： 黄晓飞 ,  卢森林 ,  曹春雨 ,  吕亚丰 ,  张琼

IPC: C12N15/62 ,  C12N7/01 ,  C12N15/864 ,  C12N15/65 ,  A61K38/18 ,  A61P3/10 ,  A61P3/06 ,  A61P3/04 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了一种提高FGF‑21持续表达水平和稳定性的AAV及其应用，利用基因工程技术将ABD与FGF‑21连接，然后重组至AAV2核心质粒上，构建得到重组质粒pAAV‑ABD‑FGF‑21‑Luciferase，将重组质粒转染、包装得到的重组AAV2‑ABD‑FGF‑21腺相关病毒，该病毒可以介导ABD‑FGF‑21‑Luciferase基因转导小鼠肝脏并持续地分泌性表达ABD‑FGF‑21，显著增加小鼠外周血FGF‑21水平和稳定性，在II型糖尿病小鼠体内具有显著增强FGF‑21降血糖和降血脂的效应，该效应可以维持7周以上，同时显著降低了胰岛素抵抗和高脂饮食HFD造成的II型糖尿病小鼠肝损伤。

公开(公告)号：CN115992208A

公开(公告)日：2023-04-21

申请号：CN202210930460.9

申请日：2022-08-03

Applicant: 三峡大学

Inventor： 吕亚丰 ,  曹春雨 ,  王静

IPC: C12Q1/6858 ,  C12N15/11

Abstract: Twitcher小鼠模型是目前研究GLD疾病发病机制及治疗方法的一种最主要的动物模型，该模型是由GALC基因自发突变所导致的一种C57BL/6小鼠模型，目前常用的基因型鉴定方法耗时长且价格昂贵。为了克服这一弊端，本发明通过设计特殊的鉴定引物，并采用PCR法及利用限制性核酸内切酶EcoR V进行单酶切验证，从而建立了一种快速、高效且经济的基因型鉴定方法，为Twitcher小鼠的基因型鉴定提供了参考。

公开(公告)号：CN115044615A

公开(公告)日：2022-09-13

申请号：CN202210461802.7

申请日：2022-04-28

Applicant: 三峡大学

Inventor： 吕亚丰 ,  曹春雨 ,  张浩 ,  黄文峰 ,  黄晓飞 ,  吴红艳

IPC: C12N15/864 ,  C12N7/01 ,  A61K48/00 ,  A61P35/00 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了靶向乳腺癌细胞的嵌合AAV2衣壳、靶向感染乳腺癌细胞的AAV2载体构建方法、使用所述载体靶向乳腺癌细胞的方法以及携带自杀基因治疗乳腺癌的方法。本发明通过基因工程技术将EC1蛋白插入到AAV2衣壳表面以及突变VP1蛋白R585、R588位点，获得一种AAV病毒载体（AAV2M‑EC1），与野生型AAV2相比，AAV2M‑EC1具有靶向乳腺癌细胞的特性，且大大减少对肝脏、肌肉组织的感染能力。以AAV2M‑EC1为载体，携带自杀基因HSV‑TK，尾静脉注射移植瘤小鼠后，可显著抑制小鼠乳腺癌细胞的增殖。

公开(公告)号：CN114606264A

公开(公告)日：2022-06-10

申请号：CN202210283090.4

申请日：2022-03-22

Applicant: 三峡大学

Inventor： 吕亚丰 ,  曹春雨 ,  田国帅 ,  秦宇

IPC: C12N15/864 ,  C07K14/015 ,  A61K48/00 ,  A61P25/00 ,  A61P25/14 ,  A61P25/16 ,  A61P25/28

Abstract: 本发明涉及一种新型AAV载体，该病毒载体包含对应于AAV9的第588位氨基酸位点插入多肽序列WPTSYDA，同时存在H527突变为Y，R533氨基酸突变为S，另外用于表达目的基因的启动子为hSyn，与野生型AAV9载体相比，该AAV9.7YS突变体具有更好的穿透血脑屏障能力，静脉注射该病毒后感染神经系统的能力更强，而对外周组织（心脏、肝脏、骨骼肌）的感染效率更低。本发明还涉及公开的病毒载体的包装制备方法以及在基因治疗中的用途。

公开(公告)号：CN118389454A

公开(公告)日：2024-07-26

申请号：CN202410230674.4

申请日：2024-02-29

Applicant: 三峡大学

Inventor： 吕亚丰 ,  曹春雨 ,  宋新宇

IPC: C12N7/01 ,  C07K14/015 ,  C12N15/35 ,  C12N15/864 ,  A61K48/00 ,  A61P21/00 ,  A61P35/00 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了涉及基因工程领域中的rAAV9病毒载体衣壳蛋白的突变，突变位点涉及rAAV9衣壳蛋白的SUMO化修饰位点和/或泛素化修饰位点，分别为K84、K105、K316、K528、K557，将上述突变位点的赖氨酸突变为精氨酸，以突变后的pAAV9质粒作为载体，体内研究证实rAAV9衣壳蛋白K105及K557突变为R后，其基因的表达水平显著提高。本发明的目的在于提供比rAAV9更加高效表达目的基因的rAAV病毒载体，为神经肌肉疾病、慢性疾病以及肿瘤的基因治疗提供更好的载体选择，同时由于该载体的高转导效率，也将大大降低基因药物的生产成本，最终使患者受惠。

公开(公告)号：CN114685651B

公开(公告)日：2023-07-11

申请号：CN202210396426.8

申请日：2022-04-15

Applicant: 三峡大学

Inventor： 吕亚丰 ,  曹春雨 ,  李舒月 ,  张浩 ,  秦宇 ,  杨建林 ,  王静

IPC: C07K16/08 ,  C07K16/06 ,  C12N15/70 ,  C12N15/35 ,  G01N33/569

Abstract: 本发明提供一种特异识别AAV9衣壳蛋白的多克隆抗体及制备方法，将8处AAV9衣壳可变区氨基酸序列依次连接即为本发明所指AAV9可变区VR的氨基酸序列SEQ ID NO.1，由氨基酸序列得到编码AAV9衣壳可变区的DNA序列如SEQ ID NO.2，将DNA序列插入到原核表达载体pET30a获得质粒pET30a‑AAV‑VR，转化大肠杆菌扩增，采用IPTG诱导表达多价抗原肽，在变性条件下经Ni‑NTA树脂进行纯化，然后透析复性，纯化得到AAV9可变区蛋白免疫日本大耳朵白兔，以此制备多克隆抗体，ELISA检测抗体效价，Western‑blot及细胞免疫荧光检测抗体的应用。抗体效价为1:10240000，该抗体能特异性识别AAV9衣壳蛋白序列。为后续AAV载体开发以及AAV生物学功能研究奠定了基础。

公开(公告)号：CN113999861A

公开(公告)日：2022-02-01

申请号：CN202111050778.X

申请日：2021-09-08

Applicant: 三峡大学

Inventor： 吕亚丰 ,  曹春雨 ,  杨建林 ,  李舒月 ,  张浩

IPC: C12N15/35 ,  C12N15/70 ,  C07K14/015 ,  C07K16/08 ,  C07K16/06 ,  C07K1/22 ,  G01N33/569

Abstract: 本发明提供一种腺相关病毒衣壳蛋白保守区多克隆抗体的制备方法及应用，通过DNAMAN软件分析，将AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10衣壳蛋白氨基酸序列中连续7个及以上氨基酸同源的序列依次拼接，获得的序列即为AAV衣壳蛋白保守区序列，与保守区氨基酸序列对应可确定编码衣壳蛋白保守区的DNA序列，根据宿主菌的特性，对获得的DNA序列进行密码子优化，将优化后的DNA序列合成并构建到pET‑30a原核表达载体，得到pET‑30a‑AAV‑RC保守区蛋白质粒，DNA序列如SEQ ID NO.1，氨基酸序列如SEQ ID NO.2。成功制备了抗AAV衣壳保守区蛋白的多克隆抗体，识别所有血清型AAV，特异性识别和结合人真核细胞中转染表达的AAV衣壳蛋白。