公开(公告)号：CN109384838A

公开(公告)日：2019-02-26

申请号：CN201710658328.6

申请日：2017-08-04

Applicant: 杭州阿诺生物医药科技股份有限公司

Inventor： 何南海 ,  路杨 ,  杨东晖 ,  王骥

IPC: C07K14/47 ,  C07K1/14 ,  C12N15/12 ,  C12N15/85

CPC classification number: C07K1/14 ,  C07K1/22 ,  C07K14/47 ,  C07K19/00 ,  C12N15/66 ,  C12N15/67 ,  C12N15/79 ,  C12N15/85 ,  C12N15/87

Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及三重转录因子及其在哺乳动物蛋白表达系统的应用。本发明提供了一种转录因子组合物，其含有ELL转录因子、AFF转录因子和CRTC转录因子，本发明提供了一种重组载体，其是将转录因子组合物克隆到哺乳动物表达载体中而得到。本发明还提供了一种哺乳动物蛋白表达系统，其通过将重组表达载体与目的基因表达载体共同转染到细胞株中表达得到，所述重组表达载体的总量与目的基因表达载体的总量的比为1：1-5，或者通过将含有三重转录因子的目的基因表达载体转染到细胞株中表达得到。本发明所得到的哺乳动物重组蛋白表达系统与传统方法相比，具有高产量、低成本的优势，能够有效提高重组蛋白的产量，并保持其完整的翻译后修饰来提高生物活性。

公开(公告)号：CN103992389B

公开(公告)日：2018-04-06

申请号：CN201310412013.5

申请日：2013-09-10

Applicant: 杭州阿诺生物医药科技股份有限公司

Inventor： 杨东晖 ,  路杨 ,  陈晓航

IPC: C07K7/16 ,  C07K1/06 ,  C07K1/04

CPC classification number: Y02P20/55

Abstract: 本发明涉及一种固相环化合成去氨加压素的方法，解决了现有空气液相氧化带来大量废液，生产落后，效能不高以及碘作为氧化剂氧化的副产物多的技术问题，其合成工艺步骤如下：首先在Rink Amide AM树脂上依次偶联9个氨基酸，偶联的氨基酸顺序为：Fmoc‑Gly‑OH、Fmoc‑D‑Arg(pbf)‑OH、Fmoc‑Pro‑OH、Fmoc‑Cys(Trt)‑OH、Fmoc‑Asn(Trt)‑OH、Fmoc‑Gln(Trt)‑OH、Fmoc‑Phe‑OH、Fmoc‑Tyr(tBu)‑OH、Mpa(Trt)‑OH，然后使用1%TFA/DCM去除Cys(Trt)和Mpa(Trt)上的保护基Trt，再用氧化试剂固环得到环肽树脂，最后裂解得到去氨加压素。本发明提供了一种反应操作简单、成本低、收率较高，适合规模化生产的去氨加压素的合成工艺。

公开(公告)号：CN103980357B

公开(公告)日：2017-07-07

申请号：CN201310412012.0

申请日：2013-09-10

Applicant: 杭州阿诺生物医药科技股份有限公司

Inventor： 杨东晖 ,  路杨 ,  陈晓航 ,  沈珂

IPC: C07K14/575 ,  C07K1/06 ,  C07K1/04

Abstract: 本发明公开了一种固相合成胸腺法新的制备方法。本发明涉及Fmoc策略固相法制备胸腺法新的一种新型工艺。包括以下步骤：（1）由Fmoc‑Asp‑OtBu和合适替代度的Rink Amide MBHA 树脂开始合成Fmoc‑Asp(Rink Amide MBHA树脂)‑OtBu。（2）将Fmoc‑Asp(Rink Amide MBHA树脂)‑OtBu采用逐一偶联或是片段法偶联的方式合成得到胸腺法新肽树脂，其中Glu18、Lys19两个氨基酸的偶联采用片段法一步接肽，其余的氨基酸采用逐一偶联；在Asp6、Thr12、Leu16、Lys17、Glu18‑Lys19等偶联之前的去保护采用混合去保护试剂进行去保护；在偶联Asp2之前对肽树脂进行特殊的酰化试剂进行封端。（3）对胸腺法新肽树脂进行裂解，得到粗肽，经RP‑HPLC纯化、转盐、冻干得到胸腺法新。本发明提供了一种产品纯度高、易于纯化的胸腺法新固相合成方法。

公开(公告)号：CN103992401B

公开(公告)日：2017-05-17

申请号：CN201410179385.2

申请日：2014-04-30

Applicant: 杭州阿诺生物医药科技股份有限公司

Inventor： 路杨 ,  杨东晖 ,  陈晓航 ,  周亮 ,  程丽

IPC: C07K14/575 ,  C07K1/20 ,  C07K1/18 ,  C07K1/06 ,  C07K1/04

CPC classification number: Y02P20/55

Abstract: 本发明涉及一种制备艾塞那肽的方法，解决了现有技术存在的成本高，收率低，杂质（des‑Glu15,Glu16‑艾塞那肽）含量较大，不适合规模化生产的问题。本发明的具体步骤为：A）以氨基树脂为起始树脂，通过Fmoc固相合成法，按照艾塞那肽主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，其中，肽序15‑17的氨基酸偶联反应中，溶液DMF中添加其体积20 %的2,2,2‑三氟乙醇和1.5 mol/L的尿素；B）肽树脂裂解后，第一次纯化采用反相填料，第二次纯化采用阴离子树脂，脱盐后可以使杂质des‑Glu15,Glu16‑艾塞那肽含量降低到0.1 %以下，冻干，得到艾塞那肽。本发明提供了一种成本低、纯度高，适合规模化生产的艾塞那肽的制备工艺，此工艺既能有效控制des‑Glu15,Glu16‑艾塞那肽含量又不影响艾塞那肽的收率。

公开(公告)号：CN104371974B

公开(公告)日：2017-03-22

申请号：CN201410573311.7

申请日：2014-10-24

Applicant: 杭州阿诺生物医药科技股份有限公司

Inventor： 何学松 ,  何南海 ,  叶晓峰 ,  林晓峰 ,  杨东晖 ,  路杨

IPC: C12N5/0783

Abstract: 本发明涉及一种自体外周血淋巴细胞的培养方法，包括如下步骤：（1）从外周血中分离单个核细胞，重悬于X-VIVO15无血清培养基中，使细胞浓度为1×106 个/mL，培养3天；（2）补加X-VIVO15无血清培养基至100 mL，添加IL-2 1×103 U/mL，培养1天；（3）补加X-VIVO15无血清培养基至200-240 mL，添加IL-2 1×103 U/mL，培养3天；（4）补加X-VIVO15无血清培养基至1000 ml，添加IL-2 1×103 U/mL、CTLA-4mAb 100 ng/mL、PD-1mAb 100 ng/mL；（5）培养5-7天，制得自体外周血淋巴细胞。本发明通过向X-VIVO15无血清培养基中添加多种单抗及细胞因子，提高效应细胞群活化效率和扩增效率。特别是体外加载CTLA-4、PD-1抗体以覆盖所有CIK细胞表面的CTLA-4、PD-1分子，有效的降低了T调节细胞的含量，进一步提高CIK细胞对肿瘤的杀伤作用。

公开(公告)号：CN104357394B

公开(公告)日：2017-03-22

申请号：CN201410573897.7

申请日：2014-10-24

Applicant: 杭州阿诺生物医药科技股份有限公司

Inventor： 何学松 ,  何南海 ,  叶晓峰 ,  林晓峰 ,  杨东晖 ,  路杨

IPC: C12N5/0784 ,  C12N5/0783

Abstract: 本发明涉及一种自体外周血淋巴细胞DC-CIK的培养方法，包括如下步骤：（1）外周血单个核细胞的分离；（2）DC细胞的分离培养（；3）CIK细胞的诱导培养；（4）DC和CIK的共培养制备DC-CIK细胞，并添加CTLA-4mAb 100ng/mL、PD-1mAb 100ng/mL；(5)离心收集培养的DC-CIK细胞。本发明通过向无血清培养基中添加多种单抗及细胞因子，提高效应细胞群活化效率和扩增效率。特别是体外加载CTLA4 抗体、PD-1抗体以覆盖所有CIK细胞表面的CTLA4、PD-1分子,使其不能和DC上相应受体结合，有效的降低了T调节细胞的含量，进一步提高CIK细胞对肿瘤的杀伤作用。

公开(公告)号：CN104938477B

公开(公告)日：2017-12-22

申请号：CN201510168081.0

申请日：2015-04-10

Applicant: 杭州阿诺生物医药科技股份有限公司

Inventor： 何学松 ,  闫桂云 ,  杨东晖 ,  路杨

IPC: C12N5/07 ,  A01N1/02

Abstract: 本发明提供一种CIK细胞的冻存液及冻存方法。本发明使用人自体血浆替代血清，避免了外源血清存在传染病的风险，所采用的试剂适用于程序降温盒这种简单的程序降温方法。本发明的试剂含有二甲基亚砜、自体血浆、培养基比例为1:4:5。本发明具有方法简单，细胞复苏活性高的特点。适合于进行放化疗前期病人或者健康人群将免疫细胞以CIK细胞的方式进行存储，以备于以后的CIK细胞治疗。

公开(公告)号：CN104447979B

公开(公告)日：2017-09-26

申请号：CN201410643660.1

申请日：2014-11-14

Applicant: 杭州阿诺生物医药科技股份有限公司

Inventor： 路杨 ,  杨东晖 ,  周亮

IPC: C07K14/575 ,  C07K1/06 ,  C07K1/04 ,  C07K1/02

CPC classification number: Y02P20/55

Abstract: 本发明涉及一种制备奈西利肽的方法，本发明具体步骤为：A）通过液相法合成三肽片段H‑Arg(Boc)2‑Arg(Boc)2‑His(Trt)‑OtBu；B）采用固相合成法，以2‑CTC‑树脂为起始树脂，按照奈西利肽主链1‑29的肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸；C）在有机碱条件下，采用碘固环；D）裂解，得到全保护型奈西利肽主链1‑29肽片段；E）三肽片段H‑Arg(Boc)2‑Arg(Boc)2‑His(Trt)‑OtBu和全保护型奈西利肽主链1‑29肽片段偶联；F）裂解、纯化、冻干后得到奈西利肽。本发明提供了一种纯度高、成本低，适合规模化生产的奈西利肽制备工艺，此工艺不仅可以有效控制消旋肽杂质D‑His32‑奈西利肽、缺失肽杂质Des‑Arg31‑奈西利肽或Des‑Arg30‑奈西利肽，还优化固环条件提高了奈西利肽的收率。

公开(公告)号：CN107698594A

公开(公告)日：2018-02-16

申请号：CN201710652268.7

申请日：2017-08-02

Applicant: 苏州国匡医药科技有限公司 ,  杭州阿诺生物医药科技股份有限公司

Inventor： 梅德盛 ,  刘爱风 ,  汪奎 ,  孙靖

IPC: C07D487/04 ,  C07D519/00 ,  C07F9/6561 ,  A61K31/4439 ,  A61K31/407 ,  A61K31/4709 ,  A61K31/416 ,  A61K31/4155 ,  A61K31/437 ,  A61K31/506 ,  A61K31/422 ,  A61K31/5377 ,  A61K31/675 ,  A61P35/00 ,  A61P35/02 ,  A61P35/04 ,  A61P31/12 ,  A61P37/06 ,  A61P37/02 ,  A61P31/18 ,  A61P31/14 ,  A61P25/28 ,  A61P11/06 ,  A61P19/02 ,  A61P29/00 ,  A61P37/08 ,  A61P17/06 ,  A61K45/06

Abstract: 在本发明涉及的化合物为一种或多种吲哚胺2，3-双加氧酶的抑制剂。此外，本发明阐述了包含该化合物的药物组分及制剂，及这类吲哚胺2，3-双加氧酶抑制剂的用途，可单一用药或与其它药物联合用药，用来治疗与吲哚胺2，3-双加氧酶相关的症状。

公开(公告)号：CN103980350B

公开(公告)日：2018-01-09

申请号：CN201310411997.5

申请日：2013-09-10

Applicant: 杭州阿诺生物医药科技股份有限公司

Inventor： 杨东晖 ,  路杨 ,  周亮 ,  沈珂

IPC: C07K7/16 ,  C07K1/06 ,  C07K1/04

Abstract: 本发明涉及一种固环合成阿托西班的方法，解决了现有空气液相氧化带来大量废液，生产落后，效能不高以及碘作为氧化剂氧化的副产物多的技术问题，其合成工艺步骤如下：首先在AM树脂上依次偶联9个氨基酸，偶联的氨基酸顺序为：Fmoc‑Gly‑OH、Fmoc‑Orn(Boc)‑OH、Fmoc‑Pro‑OH、Fmoc‑Cys(Trt)‑OH、Fmoc‑Asn(Trt)‑OH、Fmoc‑Thr(tBu)‑OH、Fmoc‑Ile‑OH、Fmoc‑D‑Tyr(Et)‑OH、Mpa(Trt)‑OH，然后使用1%TFA/DCM去除Cys(Trt)上的保护基Trt，接下来加氧化试剂固环得到环肽树脂，最后裂解得到阿托西班。本发明提供了一种反应操作简单、成本低、收率较高，适合规模化生产的阿托西班的合成工艺。