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公开(公告)号：CN102703552B
公开(公告)日：2014-10-29
申请号：CN201210150051.3
申请日：2012-05-15
Applicant: 山东阿华生物药业有限公司 , 华东理工大学 , 山东东阿阿胶股份有限公司
Abstract: 本发明公开了一种由人胰岛素前体制备人胰岛素的方法，包括以下步骤：（1）在水相缓冲液中将人胰岛素前体进行酶切反应得到B链第30位缺少苏氨酸的人双链胰岛素前体desB30；（2）在有机相中将双链人胰岛素前体desB30进行转肽反应得到胰岛素酯；（3）将胰岛素酯脱酯，即得。本发明方法方法相比于现有的将人胰岛素前体一步转化成人胰岛素酯的方法，转肽效率有显著提高，转肽反应时间大幅缩短，副产物少，整体收率更高，成本更低。本发明对于规模化、工业化利用毕赤酵母表达生产重组人胰岛素提供了一种简捷、高效的方法。
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公开(公告)号：CN102703552A
公开(公告)日：2012-10-03
申请号：CN201210150051.3
申请日：2012-05-15
Applicant: 山东阿华生物药业有限公司 , 华东理工大学 , 山东东阿阿胶股份有限公司
Abstract: 本发明公开了一种由人胰岛素前体制备人胰岛素的方法，包括以下步骤：（1）在水相缓冲液中将人胰岛素前体进行酶切反应得到B链第30位缺少苏氨酸的人双链胰岛素前体desB30；（2）在有机相中将双链人胰岛素前体desB30进行转肽反应得到胰岛素酯；（3）将胰岛素酯脱酯，即得。本发明方法方法相比于现有的将人胰岛素前体一步转化成人胰岛素酯的方法，转肽效率有显著提高，转肽反应时间大幅缩短，副产物少，整体收率更高，成本更低。本发明对于规模化、工业化利用毕赤酵母表达生产重组人胰岛素提供了一种简捷、高效的方法。
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公开(公告)号：CN1605868A
公开(公告)日：2005-04-13
申请号：CN03153838.X
申请日：2003-08-25
Applicant: 山东阿华生物药业有限公司
IPC: G01N33/44 , G01N33/58 , G01N33/68 , G01N33/561 , C12Q1/68
Abstract: 本发明公开了一种鉴定动物物种的方法，特别是鉴定动物皮张的方法，尤其是鉴定驴皮的方法，所述方法是通过细胞色素B基因聚合酶链式反应－限制性酶切片段长度多态性方法制得的DNA指纹图谱来鉴定。本发明填补了细胞色素B基因PCR－RFLP方法来鉴定动物物种的空白，具有鉴定率为100％的优点。
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公开(公告)号：CN105111304B
公开(公告)日：2018-12-14
申请号：CN201510645026.6
申请日：2015-09-30
Applicant: 山东阿华生物药业有限公司 , 东阿阿胶股份有限公司 , 华东理工大学
Abstract: 本发明公开了一种重组人胰岛素前体的纯化和酶切转换方法，属于重组人胰岛素及其类似物的制备领域。本发明将分泌表达的重组人胰岛素前体的发酵上清用阳离子层析柱进行纯化，在层析的洗涤时先后采用两种不同洗涤液进行洗涤，更快速的进行目的蛋白的洗脱，缩短洗脱时间，减少目的蛋白沉淀，同时减少洗脱样品体积；在洗脱时采用pH值7.0‑9.0的洗脱液进行洗脱，洗脱后的产物不需进行换相操作，直接加入胰蛋白酶进行酶切转换，转换效率高。本发明方法操作简单，经过一步离子层析纯化完成对发酵液上清的粗纯化和换相操作，能够将样品纯度从14％提高至95％，且纯化后的样品直接进行酶切，酶切转换效率在95％以上，简化生产工艺，节约成本。
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公开(公告)号：CN105440125A
公开(公告)日：2016-03-30
申请号：CN201510835561.8
申请日：2015-11-25
Applicant: 山东阿华生物药业有限公司 , 东阿阿胶股份有限公司
IPC: C07K14/62
Abstract: 本发明公开了一种地特胰岛素或其类似物的制备方法，属于胰岛素类似物的制备领域。本发明以B链第30位缺少苏氨酸的人双链胰岛素前体desB30蛋白为原料，在未保护desB30蛋白双链N末端α-氨基的条件下，在pH 8.0-11的碱性环境下利用活化酯一步选择性地酰化B29位赖氨酸的ε-氨基，高效生成地特胰岛素或其类似物。本发明对胰岛素前体的酰化反应的pH值、原料比以及酰化时间等参数进行了优化，显著提升了地特胰岛素或其类似物的收率，具有酰化效率高、副产物少、酰化反应时间短、酰化步骤少、工艺简单、生产成本低等优点，为规模化、工业化一步酰化制备地特胰岛素或其类似物提供了一种简捷、高效的方法。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN105301125A
公开(公告)日：2016-02-03
申请号：CN201510578461.1
申请日：2015-09-11
Applicant: 东阿阿胶股份有限公司 , 山东阿华生物药业有限公司
IPC: G01N30/02
Abstract: 本发明公开了重组人胰岛素或其类似物的主要脱氨产物位点的鉴定方法。本发明根据重组人胰岛素及其类似物的氨基酸序列结构，采用酶切还原法将待测重组人胰岛素及类似物样品降解为小肽段，再结合LC-MS/MS液质联用技术鉴定重组人胰岛素或其类似物的脱氨基肽段并对脱氨基位点进行精确定位。本发明鉴定方法灵敏度高、重复性好、快速简便，可准确鉴定待测重组人胰岛素或其类似物样品中主要脱氨产物的位点，为重组人胰岛素或其类似物有关物质的定性提供了一种快速、简便的鉴定方法。
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公开(公告)号：CN105111304A
公开(公告)日：2015-12-02
申请号：CN201510645026.6
申请日：2015-09-30
Applicant: 山东阿华生物药业有限公司 , 东阿阿胶股份有限公司 , 华东理工大学
Abstract: 本发明公开了一种重组人胰岛素前体的纯化和酶切转换方法，属于重组人胰岛素及其类似物的制备领域。本发明将分泌表达的重组人胰岛素前体的发酵上清用阳离子层析柱进行纯化，在层析的洗涤时先后采用两种不同洗涤液进行洗涤，更快速的进行目的蛋白的洗脱，缩短洗脱时间，减少目的蛋白沉淀，同时减少洗脱样品体积；在洗脱时采用pH值7.0-9.0的洗脱液进行洗脱，洗脱后的产物不需进行换相操作，直接加入胰蛋白酶进行酶切转换，转换效率高。本发明方法操作简单，经过一步离子层析纯化完成对发酵液上清的粗纯化和换相操作，能够将样品纯度从14％提高至95％，且纯化后的样品直接进行酶切，酶切转换效率在95％以上，简化生产工艺，节约成本。
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公开(公告)号：CN105301125B
公开(公告)日：2017-11-03
申请号：CN201510578461.1
申请日：2015-09-11
Applicant: 东阿阿胶股份有限公司 , 山东阿华生物药业有限公司
IPC: G01N30/02
Abstract: 本发明公开了重组人胰岛素或其类似物的主要脱氨产物位点的鉴定方法。本发明根据重组人胰岛素及其类似物的氨基酸序列结构，采用酶切还原法将待测重组人胰岛素及类似物样品降解为小肽段，再结合LC‑MS/MS液质联用技术鉴定重组人胰岛素或其类似物的脱氨基肽段并对脱氨基位点进行精确定位。本发明鉴定方法灵敏度高、重复性好、快速简便，可准确鉴定待测重组人胰岛素或其类似物样品中主要脱氨产物的位点，为重组人胰岛素或其类似物有关物质的定性提供了一种快速、简便的鉴定方法。
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公开(公告)号：CN102816819A
公开(公告)日：2012-12-12
申请号：CN201210287424.1
申请日：2012-08-13
Applicant: 山东阿华生物药业有限公司 , 华东理工大学 , 山东东阿阿胶股份有限公司
IPC: C12P21/06
Abstract: 本发明公开了一种提高人胰岛素前体融合蛋白酶切转换成B30缺苏氨酸人胰岛素（desB30）产率的方法，包括：（1）将人胰岛素前体融合蛋白表达产物依次采用离子交换和反相层析的方法进行纯化；（2）收集反相层析的洗脱液，加入Tris或NH4HCO3，再加入胰蛋白酶进行酶切转换。本发明利用反相层析对胰岛素前体融合蛋白的离子交换收集液进行再次纯化，达到了去除色素提高胰岛素前体融合蛋白纯度的目的，又将胰岛素前体融合蛋白置换到适宜的有机溶剂的环境中，显著降低了其在水相中产生聚体的现象，酶切转换效率相应的提高了15%以上，这对于以desB30为原料转肽生成原型胰岛素或者地特胰岛素，可以较大幅度的降低生产成本。
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公开(公告)号：CN105111305B
公开(公告)日：2018-12-14
申请号：CN201510651298.7
申请日：2015-10-10
Applicant: 山东阿华生物药业有限公司 , 东阿阿胶股份有限公司 , 华东理工大学
Abstract: 本发明公开了一种酰化胰岛素的色谱纯化方法，属于重组胰岛素或胰岛素类似物的制备领域。本发明酰化胰岛素的色谱纯化方法以高级硅胶载体(如C4、C8和C18等烷烃为配基的反相填料)作为层析填料，利用高压色谱系统对酰化胰岛素进行精细分离纯化，在pH为6.5‑8.0的碱性洗脱液环境下，可一步将粗样品纯度由50‑60％提高至99.0％以上，纯化后样品收率稳定在90％以上。另外，本发明方法粗样样品上样量大，极大的节省了纯化成本；色谱纯化过程中线性流速高，可做到对胰岛素类似物的快速纯化。本发明方法操作简单、稳定可靠，具有较强的可放大性，适合作为工业化制备胰岛素类似物的色谱纯化方法。
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