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公开(公告)号：CN102703552B
公开(公告)日：2014-10-29
申请号：CN201210150051.3
申请日：2012-05-15
Applicant: 山东阿华生物药业有限公司 , 华东理工大学 , 山东东阿阿胶股份有限公司
Abstract: 本发明公开了一种由人胰岛素前体制备人胰岛素的方法，包括以下步骤：（1）在水相缓冲液中将人胰岛素前体进行酶切反应得到B链第30位缺少苏氨酸的人双链胰岛素前体desB30；（2）在有机相中将双链人胰岛素前体desB30进行转肽反应得到胰岛素酯；（3）将胰岛素酯脱酯，即得。本发明方法方法相比于现有的将人胰岛素前体一步转化成人胰岛素酯的方法，转肽效率有显著提高，转肽反应时间大幅缩短，副产物少，整体收率更高，成本更低。本发明对于规模化、工业化利用毕赤酵母表达生产重组人胰岛素提供了一种简捷、高效的方法。
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公开(公告)号：CN102703552A
公开(公告)日：2012-10-03
申请号：CN201210150051.3
申请日：2012-05-15
Applicant: 山东阿华生物药业有限公司 , 华东理工大学 , 山东东阿阿胶股份有限公司
Abstract: 本发明公开了一种由人胰岛素前体制备人胰岛素的方法，包括以下步骤：（1）在水相缓冲液中将人胰岛素前体进行酶切反应得到B链第30位缺少苏氨酸的人双链胰岛素前体desB30；（2）在有机相中将双链人胰岛素前体desB30进行转肽反应得到胰岛素酯；（3）将胰岛素酯脱酯，即得。本发明方法方法相比于现有的将人胰岛素前体一步转化成人胰岛素酯的方法，转肽效率有显著提高，转肽反应时间大幅缩短，副产物少，整体收率更高，成本更低。本发明对于规模化、工业化利用毕赤酵母表达生产重组人胰岛素提供了一种简捷、高效的方法。
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公开(公告)号：CN102816819A
公开(公告)日：2012-12-12
申请号：CN201210287424.1
申请日：2012-08-13
Applicant: 山东阿华生物药业有限公司 , 华东理工大学 , 山东东阿阿胶股份有限公司
IPC: C12P21/06
Abstract: 本发明公开了一种提高人胰岛素前体融合蛋白酶切转换成B30缺苏氨酸人胰岛素（desB30）产率的方法，包括：（1）将人胰岛素前体融合蛋白表达产物依次采用离子交换和反相层析的方法进行纯化；（2）收集反相层析的洗脱液，加入Tris或NH4HCO3，再加入胰蛋白酶进行酶切转换。本发明利用反相层析对胰岛素前体融合蛋白的离子交换收集液进行再次纯化，达到了去除色素提高胰岛素前体融合蛋白纯度的目的，又将胰岛素前体融合蛋白置换到适宜的有机溶剂的环境中，显著降低了其在水相中产生聚体的现象，酶切转换效率相应的提高了15%以上，这对于以desB30为原料转肽生成原型胰岛素或者地特胰岛素，可以较大幅度的降低生产成本。
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公开(公告)号：CN102816819B
公开(公告)日：2014-10-29
申请号：CN201210287424.1
申请日：2012-08-13
Applicant: 山东阿华生物药业有限公司 , 华东理工大学 , 山东东阿阿胶股份有限公司
IPC: C12P21/06
Abstract: 本发明公开了一种提高人胰岛素前体融合蛋白酶切转换成B30缺苏氨酸人胰岛素（desB30）产率的方法，包括：（1）将人胰岛素前体融合蛋白表达产物依次采用离子交换和反相层析的方法进行纯化；（2）收集反相层析的洗脱液，加入Tris或NH4HCO3，再加入胰蛋白酶进行酶切转换。本发明利用反相层析对胰岛素前体融合蛋白的离子交换收集液进行再次纯化，达到了去除色素提高胰岛素前体融合蛋白纯度的目的，又将胰岛素前体融合蛋白置换到适宜的有机溶剂的环境中，显著降低了其在水相中产生聚体的现象，酶切转换效率相应的提高了15%以上，这对于以desB30为原料转肽生成原型胰岛素或者地特胰岛素，可以较大幅度的降低生产成本。
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公开(公告)号：CN101265500A
公开(公告)日：2008-09-17
申请号：CN200810034058.2
申请日：2008-02-29
Applicant: 华东理工大学 , 山东东阿阿胶股份有限公司
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明提供了一种源自真核生物的中药及中药材的PCR鉴定方法，其用根据真核生物基因组SINE序列设计的物种特异性引物，对中药材及中药尤其是深度加工型中药提取的DNA样品进行PCR扩增获得扩增产物，通过对扩增产物分析判断深度加工型中药含有哪些真核生物物种，进而判断检测的样品的真伪，该PCR鉴定方法适用于中药及中药材，特别适合于加工型中药，尤其是因深度加工而导致DNA含量极少、片段极短的中药，操作简单、灵敏快速、成本低、能有效鉴定中药及中药材的真伪。
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公开(公告)号：CN1724671A
公开(公告)日：2006-01-25
申请号：CN200510027530.6
申请日：2005-07-04
Applicant: 山东东阿阿胶股份有限公司 , 华东理工大学
Abstract: 本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种重组人内皮抑素表达菌株及其可溶性表达方法。本发明提供了一种重组人内皮抑素的表达菌株和可溶性表达的方法。该菌株含有表达载体pET－Endo，该表达载体由人内皮抑素基因插入载体pET43.1a获得。培养该表达菌株，用终浓度0.1～1.0mmol/L的IPTG诱导，诱导温度25～30℃，诱导时间6～10h，外源蛋白可溶性表达量可达到总表达量的80％以上，总表达量为菌体总蛋白的50％左右。因而本发明克服了人内皮抑素以包涵体形式表达的缺陷。本发明可用于重组人内皮抑素的制备及其它重组蛋白的可溶性表达。
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公开(公告)号：CN1156691C
公开(公告)日：2004-07-07
申请号：CN01132168.7
申请日：2001-11-09
Applicant: 山东东阿阿胶股份有限公司 , 华东理工大学
IPC: G01N27/12
Abstract: 本发明公开了一种用于在线检测溶液中甲醇浓度的传感器。该传感器包括：中部设有载气管的管状壳体、半透膜、气敏电子元件和筛板等部件，将传感器设有半透膜的一端插入发酵罐，液相中的甲醇透过半透膜扩散到扩散腔，载气通过载气管穿过筛板上的筛孔进入扩散腔，与通过半透膜进入扩散腔的甲醇混合，载气与甲醇的混合物通过导气管导入气敏电子元件，即可实现对甲醇的浓度进行测定。本发明的传感器的响应时间小于120秒钟，能够满足在线检测控制的要求，不受发酵条件的影响，应用范围广泛，可用于以甲醇为碳源的酵母如汉逊酵母、球拟酵母、假丝酵母及毕赤酵母等的发酵中，或用于其他溶液中甲醇、乙醇等可挥发性有机气体的在线检测及控制。
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公开(公告)号：CN1346982A
公开(公告)日：2002-05-01
申请号：CN01132168.7
申请日：2001-11-09
Applicant: 山东东阿阿胶股份有限公司 , 华东理工大学
IPC: G01N27/04
Abstract: 本发明公开了一种用于在线检测溶液中甲醇浓度的传感器。该传感器包括:中部设有载气管的管状壳体、半透膜、气敏电子元件和筛板等部件,将传感器设有半透膜的一端插入发酵罐,液相中的甲醇透过半透膜扩散到扩散腔,载气通过载气管穿过筛板上的筛孔进入扩散腔,与通过半透膜进入扩散腔的甲醇混合,载气与甲醇的混合物通过导气管导入气敏电子元件,即可实现对甲醇的浓度进行测定。本发明的传感器的响应时间小于120秒钟,能够满足在线检测控制的要求,不受发酵条件的影响,应用范围广泛,可用于以甲醇为碳源的酵母如汉逊酵母、球拟酵母、假丝酵母及毕赤酵母等的发酵中,或用于其他溶液中甲醇、乙醇等可挥发性有机气体的在线检测及控制。
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公开(公告)号：CN1724671B
公开(公告)日：2011-07-20
申请号：CN200510027530.6
申请日：2005-07-04
Applicant: 山东东阿阿胶股份有限公司 , 华东理工大学
Abstract: 本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种重组人内皮抑素表达菌株及其可溶性表达方法。本发明提供了一种重组人内皮抑素的表达菌株和可溶性表达的方法。该菌株含有表达载体pET-Endo，该表达载体由人内皮抑素基因插入载体pET43.1a获得。培养该表达菌株，用终浓度0.1～1.0mmol/L的IPTG诱导，诱导温度25～30℃，诱导时间6～10h，外源蛋白可溶性表达量可达到总表达量的80％以上，总表达量为菌体总蛋白的50％左右。因而本发明克服了人内皮抑素以包涵体形式表达的缺陷。本发明可用于重组人内皮抑素的制备及其它重组蛋白的可溶性表达。
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公开(公告)号：CN101157896B
公开(公告)日：2011-04-27
申请号：CN200710046231.6
申请日：2007-09-21
Applicant: 华东理工大学 , 山东东阿阿胶股份有限公司
Abstract: 本发明提供了一种有利于减少水蛭素降解的重组毕赤酵母菌株，其内含有失活的KEXl基因，相对于未失活的KEXl基因，失活的KEXl基因的编码区及非编码区插入了或缺失了DNA片段，更具体地，失活的KEXl基因的编码区缺失了第289～1728位碱基序列，即其编码的蛋白酶缺失了第97～576位氨基酸，采用该重组毕赤酵母菌株表达水蛭素的发酵过程中，完整水蛭素占总水蛭素的比例达到60％～90％，完整水蛭素产量达到2.9g/1。还提供了一种制备上述重组毕赤酵母菌株的方法。本发明有利于减少水蛭素降解的重组毕赤酵母菌株能有效减少发酵过程中水蛭素的降解，提高水蛭素的产量，并有助于下游的纯化，使得生产成本降低。
