重组人胰岛素前体的纯化和酶切转换方法
Abstract:
本发明公开了一种重组人胰岛素前体的纯化和酶切转换方法,属于重组人胰岛素及其类似物的制备领域。本发明将分泌表达的重组人胰岛素前体的发酵上清用阳离子层析柱进行纯化,在层析的洗涤时先后采用两种不同洗涤液进行洗涤,更快速的进行目的蛋白的洗脱,缩短洗脱时间,减少目的蛋白沉淀,同时减少洗脱样品体积;在洗脱时采用pH值7.0-9.0的洗脱液进行洗脱,洗脱后的产物不需进行换相操作,直接加入胰蛋白酶进行酶切转换,转换效率高。本发明方法操作简单,经过一步离子层析纯化完成对发酵液上清的粗纯化和换相操作,能够将样品纯度从14%提高至95%,且纯化后的样品直接进行酶切,酶切转换效率在95%以上,简化生产工艺,节约成本。
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