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公开(公告)号：CN102212576B
公开(公告)日：2013-08-14
申请号：CN201110107125.0
申请日：2011-04-28
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种酵母展示脂肪酶催化合成维生素E亚油酸酯的方法，包括：将维生素E和亚油酸溶于有机溶剂中，加入酵母展示脂肪酶，无氧条件下于50～60℃反应10～14小时，分离、纯化制得维生素E亚油酸酯；将经线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72～144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母展示脂肪酶；本发明通过将脂肪酶展示在细胞外，利用该酶制剂催化合成维生素E亚油酸酯，不仅提高了转化效率，而且缩短了反应时间，降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN102212574B
公开(公告)日：2013-08-14
申请号：CN201110110343.X
申请日：2011-04-28
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种酵母展示脂肪酶催化合成L-抗坏血酸亚油酸酯的方法，包括：将L-抗坏血酸和亚油酸溶于有机溶剂中，加入酵母展示脂肪酶，无氧条件下于50～60℃反应4～8小时，分离、纯化制得L-抗坏血酸亚油酸酯；将经线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72～144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母展示脂肪酶；本发明通过将脂肪酶展示在细胞外，利用该酶制剂催化合成L-抗坏血酸亚油酸酯，不仅提高了转化效率，而且缩短了反应时间，降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN102212591B
公开(公告)日：2013-07-31
申请号：CN201110108787.X
申请日：2011-04-28
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种酵母展示脂肪酶催化合成蔗糖硬脂酸酯的方法，包括：将蔗糖和硬脂酸溶于有机溶剂中，加入酵母展示脂肪酶，于50～60℃反应10～14小时，分离、纯化制得蔗糖硬脂酸酯；将经线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS 115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72～144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母展示脂肪酶；本发明通过将脂肪酶展示在细胞外，利用该酶制剂催化合成蔗糖硬脂酸酯，不仅提高了转化效率，而且缩短了反应时间，降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN102212585B
公开(公告)日：2013-06-05
申请号：CN201110108817.7
申请日：2011-04-28
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种酵母展示脂肪酶催化合成淀粉磷酸酯的方法，包括：将谷物淀粉溶于水，吸涨后加入NaH2PO4和酵母展示脂肪酶，在55～65℃下搅拌反应1～1.5小时，分离、纯化制得淀粉磷酸酯。所述的酵母展示脂肪酶制备方法为：将线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72～144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母展示脂肪酶。本发明通过将脂肪酶展现在细胞外，利用该酶制剂催化合成淀粉磷酸酯，不仅提高了转化效率，而且缩短了反应时间，降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN102286110B
公开(公告)日：2012-11-21
申请号：CN201110263958.6
申请日：2011-09-07
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种酵母展示型聚半乳糖醛酸酶协同超声波处理提取紫菜多糖的方法，包括：将紫菜干粉、酵母展示型聚半乳糖醛酸酶加入水中混匀，于35～37℃搅拌反应30～45分钟，再于28～35℃利用功率为730～750W的超声波破碎1～2小时，得到细胞破碎液，分离纯化制得紫菜多糖。本发明通过将聚半乳糖醛酸酶展示在毕赤酵母细胞外，利用该酶制剂协同超声波处理破碎紫菜细胞，工艺简便、条件温和、易于控制、安全可靠，能获得较高得率、较高纯度的紫菜多糖。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102321596B
公开(公告)日：2012-11-14
申请号：CN201110260328.3
申请日：2011-09-05
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种酵母展示型脂肪酶协同超声波破碎紫菜细胞的方法，包括：将紫菜干粉、酵母展示型脂肪酶加入水中混匀，35～37℃下酶解反应30～45min后于30～32℃下利用功率为730～750W的超声波破碎65～70min；本发明还公开了一种提取紫菜蛋白和紫菜多糖的方法，将上述紫菜细胞破碎后的细胞破碎液分离即可；本发明还公开了一种制备紫菜降血压肽的方法，即将分离的紫菜蛋白利用蛋白酶在在36～37℃下酶解反应130～133min即可。本发明的方法利用酵母展示脂肪酶对紫菜细胞的细胞膜进行降解并协同超声波处理，高效破碎紫菜细胞，提高紫菜细胞破碎率，增加紫菜多糖、紫菜蛋白和紫菜降血压肽的得率。
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公开(公告)号：CN102517225A
公开(公告)日：2012-06-27
申请号：CN201110446693.3
申请日：2011-12-28
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种表面展示淀粉酶的重组酿酒酵母及构建方法和应用。该重组酿酒酵母的构建方法为：将淀粉酶基因插入酿酒酵母表达载体pGMAK中GAL1启动子下游MFα1信号肽与酿酒酵母的细胞壁α凝集素基因之间，构建获得重组质粒；采用同源重组技术将酿酒酵母的GAL1基因替换为GAL4基因，将所述重组质粒转入该细胞，获得重组酿酒酵母。本发明通过同源重组技术获得了具有双重GAL4基因的重组酿酒酵母，可有效提高GAL1启动子表达效率；同时，细胞壁α凝集素能将淀粉酶高密度展示表达在酿酒酵母细胞壁外表面。利用该重组酿酒酵母表面展示淀粉酶，表达效率较高，表达量较大，能获得较高酶活的淀粉酶，且酵母发酵培养后可直接作为淀粉酶制剂使用。
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公开(公告)号：CN102242108A
公开(公告)日：2011-11-16
申请号：CN201010172827.2
申请日：2010-05-14
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明的一种提高亚油酸异构酶活性的方法，包括以下步骤：将亚油酸异构酶基因(Genbank号：DQ227322)连接在酿酒酵母细胞壁成份α凝集素序列(Genbank号：M28164)的N端，然后插入酿酒酵母表达载体GAL1启动子(Genbank号：AY428072)下游MFα1信号肽序列(Genbank号：M17301)的C端，构建成表达框，表达框从N端到C端：GAL1启动子+MFα1信号肽序列+亚油酸异构酶基因+α凝集素序列；将包含该表达框的酵母质粒转化入酿酒酵母细胞。本发明的优点：将亚油酸异构酶展露表达在酿酒酵母细胞壁外表面，实现酶与细胞外底物的完全接触，从而显著提高亚油酸异构酶活性。
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公开(公告)号：CN102242106A
公开(公告)日：2011-11-16
申请号：CN201010171817.7
申请日：2010-05-14
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明的一种提高谷氨酸脱羧酶活力持续性的方法，包括以下步骤：将谷氨酸脱羧酶基因(Genbank号：NM_168056)连接(常规方法)在酿酒酵母细胞壁成份FLO序列(Genbank号：S73336)的N端，然后插入(常规方法)酿酒酵母表达载体GAL1启动子(Genbank号：AY428072)下游MFα1信号肽序列(Genbank号：M17301)的C端，构建成表达框，表达框从N端到C端：GAL1启动子+MFα1信号肽序列+谷氨酸脱羧酶基因+FLO序列；将包含该表达框的酵母质粒转化入酿酒酵母细胞。本发明的优点：将谷氨酸脱羧酶与酿酒酵母细胞壁成分FLO连接，如此则只要酿酒酵母细胞保持存活状态，谷氨酸脱羧酶即可保持活力。
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公开(公告)号：CN102242097A
公开(公告)日：2011-11-16
申请号：CN201010172813.0
申请日：2010-05-14
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明提供一种使β葡聚糖酶成为酿酒酵母细胞有机组成部分的技术，使β葡聚糖酶只要酿酒酵母细胞保持存活即可保持活力，从而显著提高β葡聚糖酶活力持续性。将beta葡聚糖酶基因(Genbank号：U60830)连接(常规方法连接)在酿酒酵母细胞壁成份FLO序列(Genbank号：S73336)的N端，然后插入(通过常规方法插入)酿酒酵母表达载体GAL 1启动子(Genbank号：AY428072)下游MFα1信号肽序列(Genbank号：M17301)的C端，构建成表达框，表达框从N端到C端：GAL1启动子+MFα1信号肽序列+beta葡聚糖酶基因+FLO序列；将包含该表达框的酵母质粒转化入酿酒酵母细胞。本发明的优点：将β葡聚糖酶与酿酒酵母细胞壁成分FLO连接，如此则只要酿酒酵母细胞保持存活状态，β葡聚糖酶即可保持活力。
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