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公开(公告)号：CN117965514A
公开(公告)日：2024-05-03
申请号：CN202410147861.6
申请日：2024-02-01
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种芳香族氨基酸解氨酶突变体及其制备反式肉桂酸和对香豆酸的方法，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明以来源于Zea mays的苯丙氨酸解氨酶(ZmPAL2)为出发序列，对第258位、第459位、第484位中至少一个的氨基酸进行取代，所获得的突变体与野生型相比，催化L‑苯丙氨酸的酶活力和转化率显著提升；对第135位以及与以第135位突变为基础组合第258位、第459位、第484位中的至少一个氨基酸突变，所获得的突变体与野生型相比，催化L‑酪氨酸的酶活力和转化率显著提升。以上获得的催化L‑苯丙氨酸和L‑酪氨酸的高活力突变体可应用于反式肉桂酸和对香豆酸的高效生产。
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公开(公告)号：CN117737031A
公开(公告)日：2024-03-22
申请号：CN202311795604.5
申请日：2023-12-25
申请人： 江南大学
摘要： 本发明涉及一种一步纯化固定化D‑泛解酸内酯水解酶的方法及其应用，本发明在构建热纤维梭菌来源的碳水化合物结合模块24与D‑泛解酸内酯水解酶融合蛋白，并在毕赤酵母表达系统中高密度发酵获得含有大量融合酶D‑泛解酸内酯水解酶‑碳水化合物结合模块的粗酶液，将粗酶液与微晶纤维素混合反应，利用微晶纤维素吸附融合蛋白，即可快速实现一步纯化固定化D‑泛解酸内酯水解酶的制备，不需要进行细胞破碎以及进一步的纯化步骤，且所得D‑泛解酸内酯水解酶在贮存30天后仍保持90％以上酶活性，在循环使用10次时仍保持60％以上酶活性，具有良好的稳定性和可重复利用性。
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公开(公告)号：CN117305194A
公开(公告)日：2023-12-29
申请号：CN202310234577.8
申请日：2023-03-10
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种拟无枝酸菌突变株及其应用，属于基因工程技术领域。本发明利用CRISPR/Cas12a基因编辑系统成功对拟无枝酸菌CCTCC NO:M2011265中的香兰素脱氢酶基因(vdh)和4‑羟基‑3‑甲氧基苯甲酰基‑β‑羟基丙酰辅酶脱氢酶基因(phdB)进行无痕敲除，获得拟无枝酸菌ΔvdhΔphdB菌株在3L发酵罐中，发酵60小时产香兰素的达到20.4g/L，对底物阿魏酸摩尔转化率达90.5％表现出良好的工业应用价值。
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公开(公告)号：CN112852842B
公开(公告)日：2023-06-13
申请号：CN202110086152.8
申请日：2021-01-22
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种交替糖蔗糖酶表达及其制备交替糖的方法，属于酶工程技术领域。构建的毕赤酵母工程菌(Pichia pastoris X33/pPICZa‑ASR)，经3L发酵罐高密度发酵，所产交替糖蔗糖酶酶活达到34.5U/mL以上，实现了交替糖蔗糖酶的高效表达。以蔗糖为供体，以其他小分子糖为受体，利用重组工程菌生产的交替糖蔗糖酶催化合成交替糖。本方法实现了交替糖蔗糖酶的高效表达，展现良好的工业应用前景。
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公开(公告)号：CN112760299B
公开(公告)日：2022-06-10
申请号：CN202110175757.4
申请日：2021-02-06
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了热稳定性提高的葡萄糖氧化酶突变体及其编码基因和应用，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明以来源于黑曲霉(Aspergillus niger)的葡萄糖氧化酶GOD作为母本，经多位点定点突变后得到热稳定性提高的葡萄糖氧化酶GODm。与野生型GOD在75℃下处理5min后失活相比，本发明中的突变体仍然有52.37％的酶活残余，比酶活达到534.93U/mg月是野生型GOD的2倍。本发明的突变体酶GODm热稳定性具有明显优势，有利于运输与保存，大大拓宽该酶在高温下的应用潜力。
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公开(公告)号：CN111206025B
公开(公告)日：2022-02-15
申请号：CN202010127139.8
申请日：2020-02-28
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种比活提高的溶菌酶突变体，属于生物工程技术领域。本发明公开了一种利用基因工程在人源溶菌酶C末端添加疏水短肽Val‑Ile‑Pro‑Leu‑Phe而得到的人源溶菌酶突变体，其比活提高了126％。本发明还公开了一种含突变人源溶菌酶基因的重组质粒，以及经过该重组质粒转化毕赤酵母后获得的高效表达人源溶菌酶突变体的重组毕赤酵母基因工程菌。本发明获得的人源溶菌酶突变体具有比活高，制备简单的特点，具有潜在的临床应用价值，在饲料、食品工业上也具有广泛的用途。
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公开(公告)号：CN108753852B
公开(公告)日：2021-10-26
申请号：CN201810652442.2
申请日：2018-06-22
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种生物法制备覆盆子酮的方法，包括在大肠杆菌中同时诱导表达植物来源的4‑香豆酰辅酶A连接酶、苄基丙酮合酶和苄基丙酮还原酶。本发明在生物合成覆盆子酮的代谢途径上新添加了苄基丙酮还原酶(RiRZS1)，增加了中间产物对羟基亚苄基丙酮的转化效率。此外，摇瓶发酵覆盆子酮的产量达到了70.62mg/L，进一步用生物合成法显著提高了覆盆子酮的产量。
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公开(公告)号：CN108753912B
公开(公告)日：2021-08-24
申请号：CN201810663244.6
申请日：2018-06-25
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种反式茴香脑加氧酶突变体的高通量筛选方法及突变菌株和突变体，包括以反式茴香脑加氧酶基因为模板，进行易错PCR，获得反式茴香脑加氧酶突变体文库；将所述反式茴香脑加氧酶反应底物添加入含有反式茴香脑加氧酶突变体的溶液中进行催化反应，将反应液与2,4‑二硝基苯肼进行显色反应，并加入碱溶液及有机溶剂反应，测定吸光度。本发明通过易错PCR构建突变库，并建立以2,4‑二硝基苯肼为显色剂，酶标仪测定OD470为基础的高通量筛选方式，筛选合成洋茉莉醛重组菌株的突变菌株，该方式具有高效、精准、快速的优势，突变株LSQ‑3对于合成洋茉莉醛、对茴香醛以及香兰素的催化效率均显著提高，具有良好的应用价值。
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公开(公告)号：CN112920280A
公开(公告)日：2021-06-08
申请号：CN202110436308.0
申请日：2021-04-22
申请人： 江南大学
IPC分类号： C07K19/00 , C12N9/58 , C12N9/64 , C12N15/62 , C12N15/81 , C12N1/19 , C12G1/022 , C12R1/84 , C12R1/865
摘要： 本发明公开了一种酸性蛋白酶高效表达的方法及其应用，属于基因工程领域。本发明提供的重组毕赤酵母P.pastoris GS115/pPIC9K‑en‑αSP‑acidprotea表达酶活达到5395U/mL，较含有原始α‑信号肽的对照菌株产酶酶活提高了109％，本发明的酸性蛋白在pH 1‑5范围内，该酶能够维持其60％以上的酶活力、20～40℃处理30min剩余酶活在80％以上，可适用于食品、饲料或酿造等行业。根据本发明的技术方案可以实现利用基因工程手段生产适合工业应用的酸性蛋白酶。
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公开(公告)号：CN112553226A
公开(公告)日：2021-03-26
申请号：CN202011587026.2
申请日：2020-12-29
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种毕赤酵母基因工程菌及其制备D‑泛解酸内酯水解酶的方法，属于生物工程技术领域。将编码D‑泛解酸内酯水解酶基因插入表达载体pPIC9K构建重组表达载体，并导入GS115中获得表达D‑泛解酸内酯水解酶的毕赤酵母工程菌。本发明构建的毕赤酵母工程菌，在3L发酵罐高密度发酵，发酵产酶活性达到1145U/mL，实现了D‑泛解酸内酯水解酶的高效表达，展现良好的工业应用前景。
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