一种含rfp报告基因的细菌基因敲除质粒及其应用

    公开(公告)号:CN114836455A

    公开(公告)日:2022-08-02

    申请号:CN202210589981.2

    申请日:2022-05-26

    摘要: 本发明公开了一种含rfp报告基因的细菌基因敲除质粒及其应用,属于分子生物学领域。具体地,本发明提供一种质粒pBRR50,其含有庆大霉素抗性基因、mob接合转移元件、R6K复制起始位点、多克隆位点区和由点突变lac启动子控制的红色荧光蛋白编码基因rfp;所述lac启动子的碱基序列优选如SEQ ID NO.2所示。本发明还提供了上述质粒pBRR50的构建方法及应用,该质粒能高效表达红色荧光蛋白,使细菌在日光下呈现明显的红色。在基因敲除过程中,发生第一次同源重组的细菌具有庆大霉素抗性和红色菌落表型,发生第二次同源重组的细菌从红色恢复为原来的颜色,可根据菌落颜色对发生第二次同源重组的菌株实现直接的筛选。