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公开(公告)号：CN114015786A
公开(公告)日：2022-02-08
申请号：CN202111348108.6
申请日：2021-11-15
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/6888 , C12Q1/6851 , G01N33/58 , G01N33/68 , G01N15/14
Abstract: 本发明涉及一种探究胚胎期肌肉细胞形成时间的方法,利用实时荧光定量PCR、流式细胞分析、间接免疫荧光等技术共同探索肌肉细胞形成时间，方法切实可行，可用以大量分析胚盘内肌肉细胞占多个细胞的比例，以及何时肌肉细胞形成并表达标记蛋白，对研究胚盘发育、肌肉细胞形成、建立肌肉细胞形成调控网络等有重要指导意义，极大地丰富了胚胎发育生物学研究；本发明可推广到采用不同种类家禽的胚胎期胚盘，分析胚盘内各种细胞何时形成并分化发育，为研究整体胚胎发育，解密遗传规律奠定基础；本发明鉴定方法更为简便、灵敏和高效，可以检测胚胎期基因和蛋白的微弱表达，能更加真实地反映目的细胞形成情况，也可以应用于其他禽类研究中。
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公开(公告)号：CN113671194A
公开(公告)日：2021-11-19
申请号：CN202110965416.7
申请日：2021-08-23
Applicant: 扬州大学
IPC: G01N33/68
Abstract: 本发明涉及一种筛选鸡目的蛋白互作转录因子的方法，本方法适用于建立4.5d鸡胚生殖嵴的cDNA文库，筛选已知基因的互作蛋白。可大量捕捉获得和PGCs形成相关的转录因子，完善相应的信号通路，绘制PGCs的形成调控网络，为大量体外诱导获取PGCs奠定实验数据和理论基础。该方法成本低、易操作、高通量、可达到全基因组水平，弥补了其他探讨蛋白互作方式的不准确性和不全面性，为后期深入探究新蛋白的功能、研究蛋白与蛋白的互作依赖关系等进行铺垫。适用于建立4.5d鸡胚生殖嵴的cDNA文库，筛选已知基因的互作蛋白。采用本方法，可大量捕捉获得和PGCs形成相关的转录因子，完善相应的信号通路，绘制PGCs的形成调控网络，为大量体外诱导获取PGCs奠定实验数据和理论基础。
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公开(公告)号：CN113265450A
公开(公告)日：2021-08-17
申请号：CN202110651659.3
申请日：2021-06-11
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/6858 , C12Q1/66
Abstract: 本发明涉及一种研究组蛋白H3K4me2酶/转录因子复合体调控靶基因转录的方法，查找目的样本中MLL2/ASH2L/DPY30/WDR5/RBBP5共同富集的基因，筛选出与目的样本相关的候选基因X用作后续实验；构建X基因启动子截短片段的双荧光素酶报告载体，转染293T细胞后，培养48h，收集样本进行双荧光素酶报告检测，确定核心启动区域；对核心启动区域进行生物信息学分析，利用jaspar在线网站，对核心区域可能存在的转录因子进行分析，获得与组蛋白甲基化酶结合区域相同的转录因子，作为候选复合蛋白；分别构建5个组蛋白甲基化酶的标签载体和转录因子的标签载体，利用pulldown实验，检测组蛋白甲基化酶与转录因子的结合；通过本发明，实验设计严谨，应用广泛，在不同生物学过程均适用。
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公开(公告)号：CN111965094A
公开(公告)日：2020-11-20
申请号：CN202010853561.1
申请日：2020-08-24
Applicant: 扬州大学
Abstract: 一种比较体外诱导的PGC-like细胞迁移效率的方法，属于生物技术领域。前期通过不同的诱导体系将ESCs或iPS细胞诱导分化形成PGC-like细胞，将获得的PGC-like细胞进行PKH26细胞膜表面标记，然后注射至孵化2.5天的受体鸡胚血管，封口后继续孵化至4.5天，分离鸡胚生殖嵴，进行冰冻切片后在荧光显微镜下观察红色荧光，并通过流式细胞术分析PKH26红色荧光的比例，从而比较不同体系诱导形成的PGC-like细胞的迁移能力。结果发现能够明确对比出体外不同体系诱导的PGC-like细胞的迁移能力的差异。本发明切实可靠，严谨准确，成效显著，为研究分析体外诱导的PGCs迁移归巢至生殖嵴的能力提供了一种新颖可行且高效的实验方法。
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公开(公告)号：CN111944887A
公开(公告)日：2020-11-17
申请号：CN202010868373.6
申请日：2020-08-26
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/6879 , C12Q1/6888 , C12Q1/6851 , G01N33/74 , G01N1/28 , G01N1/30 , G01N1/38 , C12N15/867 , C12N15/12 , A01K67/027
Abstract: 本发明提供了一种鸡雌性性别决定基因的筛选和验证方法，旨在明确JUN基因在鸡雌性分化中的作用，为探明鸡的性别分化及性别控制技术奠定理论和实践基础。本方法适用于鸡性别基因的筛选和验证，验证结果合理准确，实验过程严密周谨。本发明可以证明JUN基因是鸡雌性性别决定的关键调控因子，在雌性分化过程中发挥重要作用。可用于禽类性别决定基因的筛选和验证，本研究为鸡性别控制技术提供了理论支撑，在鸡的养殖业最大化经济效益中奠定基础。此外，本发明中的性别基因筛选和验证方法也可以应用于其他禽类及动物研究中，具有很好的生产和科学研究意义。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111925981A
公开(公告)日：2020-11-13
申请号：CN202010868114.3
申请日：2020-08-26
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N5/0735 , C12Q1/6879 , C12Q1/6888
Abstract: 本发明提供了一种分离鸡雌雄原始生殖细胞的方法，旨在鸡胚孵化至4.5天时,取下生殖嵴，通过血液进行性别鉴定后分离出雌雄鸡胚的PGCs，将为早期干细胞的进一步应用奠定基础。本方法适用于家禽雌雄原始生殖细胞的分离，方法新颖科学，结果准确可靠。本发明可以准确的分离鸡雌雄原始生殖细胞，为PGCs在医学以及发育生物学、禽类嵌合体制备、转基因禽类的方面研究提供准确的原材料。此外，本发明中的细胞分离方法也可以应用于其他禽类研究中，具有很好的推广应用价值。
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公开(公告)号：CN111856033A
公开(公告)日：2020-10-30
申请号：CN202010724879.X
申请日：2020-07-24
Applicant: 扬州大学
IPC: G01N33/68
Abstract: 一种研究鸡lncRNA互作蛋白的方法，属于生物技术领域。通过设计并合成了LncPGCR的sense和antisense链来进行RNA-pull down，筛选出互作蛋白。进一步结合RIP实验技术，对互作蛋白表达变化进行了探究，丰富了lncRNA与蛋白质互作的研究。本发明的方法简单易行，思路清晰，操作可行性高，在普通研究室就能完成。实验者两个月就能完成。本发明将lncRNA与蛋白质互作的研究扩展到家禽领域，并准确定位到LncPGCR上，刷新了不同物种中lncRNA通过与蛋白质互作发挥功能的范畴。
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公开(公告)号：CN111849873A
公开(公告)日：2020-10-30
申请号：CN202010748573.8
申请日：2020-07-30
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N5/0735 , C12Q1/02 , C12Q1/6888 , G01N33/68
Abstract: 一种诱导鸡的胚胎干细胞自噬的方法，属于生物技术领域。首先通过EdU检测添加了不同浓度雷帕霉素的细胞的增殖能力，其次荧光定量PCR检测自噬相关基因的表达量，最后蛋白免疫印迹检测LC3蛋白的表达量，结合雷帕霉素对细胞增殖效率的影响和诱导自噬发生的效果综合评价从而确定最佳诱导浓度和时间。探讨雷帕霉素对家禽生殖细胞的诱导条件将为自噬在胚胎干细胞向原始生殖细胞的诱导分化中的作用研究奠定基础。
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公开(公告)号：CN110484493A
公开(公告)日：2019-11-22
申请号：CN201910810444.4
申请日：2019-08-29
Applicant: 扬州大学
Abstract: 小分子化合物诱导鸡胚成纤维细胞CEFs成iPSCs的体系建立方法，其特征是，设置不同浓度的小分子化合物组合体系，细胞形态学观察、毒性试验及qRT-PCR检测相关基因的表达，验证小分子化合物在鸡CEFs诱导重编程中是否适用及其适宜诱导浓度；然后利用剔除法结合qRT-PCR、间接免疫荧光、细胞流式分析技术、AKP染色、EDU细胞增值技术手段优化诱导体系，建立适宜鸡CEFs重编程诱导体系。本发明解决了器官来源及免疫排斥问题，同时为个体发育及遗传修饰与保存的研究提供了新方法；为后续诱导多能干细胞的使用奠定理论和技术基础，也为其他物种的化学诱导重编程研究提供参考。
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公开(公告)号：CN107779428A
公开(公告)日：2018-03-09
申请号：CN201711034939.X
申请日：2017-10-30
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N5/0735
CPC classification number: C12N5/0611 , C12N2509/00
Abstract: 本发明公开了一种分离鸡胚生殖嵴来源的原始生殖干细胞方法，属于生物技术领域，包括以下步骤：（1）无菌取出21-24HH早期胚胎，使用PBS浸洗3次；（2）在解剖显微镜下去头尾，剥离出生殖嵴，获取早期生殖嵴组织，使用PBS浸洗3次；（3）加入预热的胰蛋白酶进行消化，室温消化5mins，消化时轻轻吹打使生殖嵴组织分散；（4）加入含有小牛血清的培养基终止消化，100目网筛过滤后300转离心5mins，弃上清后使用PGCs培养基进行重悬，重悬后进行差速贴壁培养，培养45mins后吸上清，连续差速贴壁培养3次后即可得到纯度较高的PGCs。本发明提取简便快速，旨在从早期生殖嵴（21-24HH）中分离大量纯净且全能性高的PGCs，为PGCs的应用奠定基础。
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