小鼠裸卵的体外成熟培养方法

    公开(公告)号:CN103898048A

    公开(公告)日:2014-07-02

    申请号:CN201410120868.5

    申请日:2014-03-27

    Abstract: 本发明公开了小鼠裸卵的体外成熟培养方法,包括以下步骤:(1)裸卵的体外成熟培养;(2)成熟裸卵的孤雌激活;(3)成熟裸卵的体外受精。本发明能够创造一个人工模拟卵母细胞自然发生成熟的环境,使裸卵在体外能够高效成熟发育,并且裸卵体外培养成熟后具备同正常发育的卵母细胞一样能够体外受精和胚胎发育。实践证实,该体系裸卵体外成熟发育效率高,体系成熟稳定,裸卵体外自然受精后胚胎发育质量高,因此,本发明能够极大地促进裸卵在人类生殖健康和现代家畜遗传育种中的应用和推广。简化了通过裸卵获得囊胚的操作,为裸卵作为卵源投入到实际生产提供了便利。

    一种组织培养器皿与组织培养方法

    公开(公告)号:CN102719361B

    公开(公告)日:2013-12-18

    申请号:CN201210203962.8

    申请日:2012-06-20

    CPC classification number: C12M23/10 C12M23/34 C12M23/38

    Abstract: 本发明公开了一种组织培养器皿与组织培养方法。组织培养器皿包括底壁与至少一个侧壁以限定出的内腔的培养皿,培养皿包括盖子,内腔中还包括至少一个碗状容器,碗状容器包括半球形的碗底与开口,开口处设有与碗状容器侧壁垂直的边挡,边挡的内缘直径小于开口,外缘直径大于开口;碗状容器底部与培养皿底壁连接。组织培养方法包括如下步骤:(1)用亲水性明胶包被碗状容器;(2)添加培养液;(3)切割和加入组织块;(4)倒置培养皿后放入培养箱。本发明通过在普通培养皿的内腔设置碗状容器,营造了组织培养所需要的气液共存的培养环境,其使用方便、成本较低、效果较好,特别适宜体积较小和密度较大的组织块的培养。

    一种可提高猪胚胎体外发育效率的猪胚胎培养液及其制备方法

    公开(公告)号:CN103074294A

    公开(公告)日:2013-05-01

    申请号:CN201310022684.0

    申请日:2013-01-22

    Abstract: 本发明公开了一种可提高猪胚胎体外发育效率的猪胚胎培养液,其以PZM-3培养液为基础培养液,并在PZM-3培养液中添加有肌醇。其中,猪胚胎培养液中肌醇的浓度为0.005g/L~0.020g/L;猪胚胎培养液中肌醇的优选浓度为0.010g/L。本发明通过在PZM-3培养液中添加合适浓度的肌醇,能够使孤雌胚或者核移植胚胎激活的过程中,帮助内源性钙离子反复振荡,模拟了自然受精胚胎时的激活状态。PZM-3培养液中添加了肌醇后的胚胎发育状况优于没有添加前的胚胎,这对于猪胚胎的体外生产和培养,建立良好的动物模型等有重要的意义。

    一种生产转基因克隆猪的激活方法

    公开(公告)号:CN103060381A

    公开(公告)日:2013-04-24

    申请号:CN201310022662.4

    申请日:2013-01-22

    Abstract: 本发明公开了一种生产转基因克隆猪的激活方法,采用电激活与化学激活的联合激活,在采用电激活前,先用放线菌酮激活处理3min~25min。作为优选,放线菌酮激活的处理时间为10~20min;进一步优选,放线菌酮激活的处理时间为10min;放线菌酮激活处理的浓度为5~10μg/mL。本发明通过改变通常联合激活方式的顺序,采用先化学激活后电激活的方案,并缩短激活方案中化学辅助激活的时间,可以得到与原来先电激活后化学激活并较长时间的组合激活方案相似的胚胎发育能力,以及较低的囊胚凋亡率和囊胚阶段的DNA甲基化水平,将该方案生产的胚胎移植后成功生产转基因克隆猪。

    适于羊的子宫角冲胚针
    45.
    发明授权

    公开(公告)号:CN102100585B

    公开(公告)日:2013-04-10

    申请号:CN201110064000.4

    申请日:2011-03-17

    Abstract: 本发明公开了一种适于羊的子宫角冲胚针,用于羊子宫角胚胎的回收,包括针管、连接管和尾管,针管为中空管,前部为斜面针尖,针管中部开有一条形孔;尾管前部是细管,后部是喇叭形开口;连接管为长条形的柔性中空管,连接管的一端与针管后部连接;连接管的另一端与尾管的前部连接;还包括过滤器,过滤器与尾管连接。本发明的冲胚针针管的外径较小,对供体羊子宫角内膜的损伤小,针管上条形孔的出液量大,胚胎回收顺畅。

    卵巢组织异体发育的方法
    48.
    发明公开

    公开(公告)号:CN102703376A

    公开(公告)日:2012-10-03

    申请号:CN201210194663.2

    申请日:2012-06-14

    Abstract: 本发明公开了卵巢组织异体发育的方法,包括以下步骤:(1)移植卵巢组织的准备;(2)卵巢组织的移植;(3)卵巢组织的收获;(4)卵母细胞的成熟。本发明采用受体小鼠的肾脏作为卵巢组织移植发育的载体,将异体卵巢组织移植在受体小鼠的肾包膜下,使卵巢组织借助肾包膜同肾脏表面紧密结合,该移植方法具有不破坏肾脏组织、对肾脏和受体小鼠损害最小及操作简单等特点,因此,该方法可作为物种卵母细胞资源的储备,对于挖掘遗传资源开展现代畜牧业的遗传育种、新品种培育和濒临灭绝野生动物的保护等均具有着重要的意义。

    猪卵丘干细胞的分离方法
    49.
    发明授权

    公开(公告)号:CN102268404B

    公开(公告)日:2012-07-11

    申请号:CN201110204169.5

    申请日:2011-07-20

    Abstract: 本发明公开了一种猪卵丘干细胞的分离方法。其方法是抽取青年母猪卵丘卵母细胞复合物,卵母细胞体外成熟培养后,消化脱离卵丘细胞,收集消化的卵丘细胞进行培养,待有细胞集落出现并形成较大的细胞集落后,消化传代接种到饲养层上,在含有细胞因子的培养液中进行培养,分离培养的卵丘干细胞具有鸟巢状细胞生长形态,细胞圆形、核较大,细胞表达干细胞特有的标记Oct4、Nanog、SSEA1,体外分化能够形成来源于三个胚层的神经细胞、肌肉细胞和肝脏细胞,结果显示从猪卵丘细胞中分离培养了卵丘干细胞。

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