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公开(公告)号：CN116837015A
公开(公告)日：2023-10-03
申请号：CN202310748566.1
申请日：2023-06-25
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及微生物代谢工程技术领域，尤其涉及高产L‑半胱氨酸的基因工程菌及其构建方法和应用。以菌株E.coli W3110EYC::hflC‑cysM::ybbK‑nrdH::hflK‑cysE为底盘菌，通过利用CRISPR‑Cas9基因编辑技术将L‑半胱氨酸合成途径中的关键酶cysM、nrdH和cysE定位到半胱氨酸外转运蛋白ydeD上，利用区室结构的优点，提升L‑半胱氨酸碳代谢重要中间产物O‑乙酰丝氨酸的积累，强化大肠杆菌L‑半胱氨酸硫代硫酸盐合成途径，提高转运效率，得到可高产L‑半胱氨酸的大肠杆菌基因工程菌株。
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公开(公告)号：CN116836904A
公开(公告)日：2023-10-03
申请号：CN202310808899.9
申请日：2023-07-04
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及微生物代谢工程技术领域，尤其涉及高产L‑半胱氨酸的基因工程菌、构建方法及应用，以工程菌株E.coliBW25113作为出发菌株，通过将serAf，serB和serC基因分别插入到基因组上的假基因yjiP，mbhA和ydeU的位置，来加强L‑半胱氨酸前体L‑丝氨酸的合成；继续敲除基因组上的基因sdaA，sdaB，tdcG，tnaA和yhaM，削弱L‑丝氨酸和L‑半胱氨酸的降解；利用pTrc99a质粒过表达解除反馈抑制的丝氨酸转移酶基因cysEf，构建pTrc99a‑cysEf导入至前一步骤获得的工程菌种中，过表达反馈抑制不敏感的丝氨酸转移酶基因cysEf，进一步获得能够高产L‑半胱氨酸的基因工程菌株，实现了L‑半胱氨酸的高效合成。
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公开(公告)号：CN116813491A
公开(公告)日：2023-09-29
申请号：CN202310198517.5
申请日：2023-03-03
Applicant: 浙江工业大学
IPC: C07C227/40 , C07C229/22
Abstract: 本发明公开了一种发酵法生产L‑高丝氨酸的分离提取方法，将含L‑高丝氨酸的发酵液进行离心，上清液通过超滤膜过滤，取滤液调节pH，用强酸型阳离子交换树脂进行柱层析，将洗脱液用活性炭脱色后减压浓缩，加入甲醇搅拌结晶，分离沉淀取上清液，减压浓缩后除去甲醇，干燥至固体，得到L‑高丝氨酸。此方法能够提高L‑高丝氨酸的产品纯度，适用于各种主要含有L‑高丝氨酸的发酵液，本发明方法操作简单、步骤短，所用试剂成本低且易得，分离成本和分离难度都很低，整体收率和纯度也达到工业生产的水平；整个过程获得L‑高丝氨酸产品纯度高达98.6％，质量收率高达86.9％。
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公开(公告)号：CN115232800B
公开(公告)日：2023-09-05
申请号：CN202210522276.0
申请日：2022-05-13
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明公开了一种298位突变的醛酮还原酶突变体及其应用，属于蛋白质工程领域。本发明通过同源建模、分子比对和分子对接，提供了醛酮还原酶突变体，将序列表中氨基酸序列2所示的第298位酪氨酸突变为组氨酸SceCPRY298H或第158位丝氨酸和第298位酪氨酸同时分别突变为丙氨酸和组氨酸SceCPRS158A/Y298H，获得酶活力提高的醛酮还原酶突变体。SceCPR、SceCPRY298H、SceCPRS158A/Y298H的比酶活分别为32.62U/mg、216.6U/mg、400.1U/mg，SceCPRY298H、SceCPRS158A/Y298H比酶活分别提高了6.64、12.26倍。
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公开(公告)号：CN115161299B
公开(公告)日：2023-09-05
申请号：CN202210522265.2
申请日：2022-05-13
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明公开了一种酿酒酵母来源的醛酮还原酶SceCPR半理性设计及其生物催化应用，属于蛋白质工程领域。本发明通过同源建模、分子比对和分子对接，提供了醛酮还原酶突变体，将序列表中氨基酸序列2所示的第158位丝氨酸突变为丙氨酸SceCPRS158A，获得酶活力提高的醛酮还原酶突变体。SceCPR、SceCPRS158A的比酶活分别为32.62U/mg、119.4U/mg，SceCPRS158A比酶活提高了3.66倍。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN116574751A
公开(公告)日：2023-08-11
申请号：CN202310515034.3
申请日：2023-05-09
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及生物技术领域，公开了一种新金色分支杆菌重组表达载体及其应用。本发明通过挖掘、优化出高强度启动子与核糖体结合位点序列片段，基于整合型过表达的遗传操作方法，以质粒pMV306为载体骨架串联甾体类药物生物转化过程中相关酶的基因整合得到一种重组表达载体，将之电转导入新金色分枝杆菌，构建得到一种基因工程菌，可在新金色分枝杆菌的基因组水平上以单拷贝的形式实现甾醇代谢路径中的关键酶或限速酶的过表达，且过表达的强度和稳定性优异。
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公开(公告)号：CN116445514A
公开(公告)日：2023-07-18
申请号：CN202310059265.8
申请日：2023-01-17
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明涉及一种cysB突变体，以及基于cysB突变体构建的高产L‑半胱氨酸的基因工程菌，以及该基因工程菌株在微生物发酵制备L‑半胱氨酸中的应用。本发明在对CysB的硫酸盐结合口袋进行随机突变的同时，通过构建的荧光报告系统进行高通量筛选，筛选出对硫源结合能力更优的CysB突变体，并基于突变体构建了一种能够对cysB表达强度一株性能更优的高产L‑半胱氨酸的基因工程菌，相对于出发菌株，基因工程菌单位时间内生长效率提高了32.7％，最终使L‑半胱氨酸的效价提高了3.3％。
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公开(公告)号：CN116376872A
公开(公告)日：2023-07-04
申请号：CN202310149518.0
申请日：2023-02-22
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明公开了一种重组酯酶突变体、基因、工程菌及其在制备(S)‑3‑环己烯‑1‑甲酸中的应用，本发明提供的重组酯酶突变体具有较高的催化活力，使得反应条件温和。100g/L的外消旋3‑环己烯‑1‑甲酸甲酯在20g/L的酯酶突变体湿菌体催化下，2h内其转化率>49.9％，生产成本降低且对环境友好。
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公开(公告)号：CN116355876A
公开(公告)日：2023-06-30
申请号：CN202310204551.9
申请日：2023-03-06
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明公开了一种重组酯酶突变体、工程菌及在合成(S)‑3‑环己烯‑1‑甲酸中的应用，所述酯酶突变体是将SEQ ID NO.1所示氨基酸序列第58位、63位、78位、240位、249位、253位、329位进行单突变或者组合突变获得的。该突变体相比于野生型酶在转化上述反应时转化率和立体选择性大大提高，反应进程耗时明显缩短。相比于化学法(S)‑3‑环己烯‑1‑甲酸，本发明提供的技术所得产品立体选择性高，反应条件更加温和，对环境友好，且对设备要求降低，大大减少了生产成本。
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公开(公告)号：CN116218752A
公开(公告)日：2023-06-06
申请号：CN202211425401.2
申请日：2022-11-14
Applicant: 浙江工业大学
Abstract: 本发明以大肠杆菌W3110为底盘细胞，通过代谢改造，得到L‑酪氨酸高产大肠杆菌WTY8菌株。在WTY8菌株中表达来源于拟南芥的芳香醛合酶基因，实现了在大肠杆菌能够以葡萄糖为底物从头合成酪醇，其成本低廉且产量高，有利于工业化的生产。
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