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公开(公告)号：CN116904477A
公开(公告)日：2023-10-20
申请号：CN202311069870.X
申请日：2023-08-23
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N15/12 , C07K14/47 , C12N15/113 , C12N9/22 , C12N5/10 , C12N15/85 , C12N15/867 , A01K67/027 , A61K48/00 , A61P31/14
Abstract: 本发明公开了利用单碱基编辑饱和点突变文库筛选并鉴定的CALR基因突变体及其在猪抗乙型脑炎病毒中的应用，利用piggyBac转座系统构建了ancBE4max核酸酶稳定表达的猪源PK‑15细胞，并制备了覆盖CALR基因全部外显子和内含子的碱基突变细胞库，通过接种JEV诱导细胞死亡进行表型筛选，鉴定到CALR基因第764‑767位碱基由GGGG连续突变为AAAA能抑制JEV复制但是不影响CALR基因自身蛋白表达，该突变位点可作为抑制JEV感染的有效抗病靶点，在猪的抗病育种和药物治疗方面具有较大的推广应用价值。
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公开(公告)号：CN115704016A
公开(公告)日：2023-02-17
申请号：CN202110927367.8
申请日：2021-08-10
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了一种利用dCas9‑p450系统进行定点突变的方法。本发明具体地公开了一种将细胞色素p450氧化酶(CYP)家族的关键酶CYP3A4蛋白与dCas9(dead Cas9)蛋白融合形成的融合蛋白及dCas9‑P450系统，所述dCas9‑P450系统包括重组载体dCas9‑p450、sgRNA表达载体、黄曲霉毒素B1(AFB1)，并公开了利用该系统将p450酶在特定基因组区域高表达，从而使得该区域的AFB1代谢成为AFBO，AFBO与靶位点DNA形成络合物，在靶位点定点引入随机突变的方法。利用该方法可以突变特定核苷酸序列，为基因功能研究提供可行的方法和强大、灵活的基因编辑工具。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112899356A
公开(公告)日：2021-06-04
申请号：CN202110235755.X
申请日：2021-03-03
Applicant: 广西扬翔股份有限公司 , 华中农业大学
IPC: C12Q1/6879 , C12Q1/6888 , C12Q1/6844 , C12N15/11
Abstract: 本发明涉及分子标记技术领域，特别涉及一种快速鉴定猪早期胚胎性别的引物组、试剂盒及其应用，本发明在传统的核酸扩增方法之上，找到灵敏度高的sgRNA，然后根据该位点进行引物设计并改进，获得一组灵敏度高、扩增效果好的特异性引物，然后再结合具有高效、灵敏和特异的CRISPR‑Cas12a核酸内切酶酶切后检测，最终能够实现简便快速、灵敏、高特异、可视化鉴定克隆或基因编辑猪早期胚胎或成纤维细胞的性别；而且本发明的方法对仪器设备要求较低，适用范围广，可作为一种应用方法进行推广。
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公开(公告)号：CN112280802A
公开(公告)日：2021-01-29
申请号：CN202011227220.X
申请日：2020-11-05
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了一种稳定表达BE4蛋白的猪肾上皮细胞系的制备方法，以传代良好的猪肾上皮细胞（PK‑15）为宿主细胞，共转染含BE4融合蛋白序列的piggyBac转座子（PB‑BE4max）载体和转座酶表达载体质粒，经过嘌呤霉素筛选阳性细胞群，然后挑选单克隆细胞系，并通过扩增BE4的特征片段以及转染活性sgRNA验证编辑活性，从而得到的稳定表达BE4蛋白的转化体。利用上述方法制备的猪肾上皮细胞系能稳定表达BE4蛋白，在猪基因组功能研究、转基因猪制备、抗药靶点筛选等猪基因工程领域具有重要的应用价值。
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公开(公告)号：CN112011623A
公开(公告)日：2020-12-01
申请号：CN202010866096.5
申请日：2020-08-25
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12Q1/6888
Abstract: 本发明属于家畜分子标记筛选技术领域，具体涉及与母猪产活仔数和有效活仔数性状相关的分子标记。所述的分子标记从ALCAM基因中筛选得到，所述分子标记的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示。在所述SEQ ID NO：1所示序列的第101位有一个C或T的碱基替换。本发明为猪的标记辅助选择提供了新的分子标记资源。
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公开(公告)号：CN110358792A
公开(公告)日：2019-10-22
申请号：CN201910658641.9
申请日：2019-07-19
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/113 , C12N15/90 , C12N5/10
Abstract: 本发明公开了一种将外源基因定点整合至ACTB（beta-actin）基因下游的打靶载体，所述的打靶载体是以ACTB基因终止密码子上下游的部分序列为左、右同源臂，将左同源臂、2A剪切肽序列、外源基因序列和右同源臂依次连接起来并构建到真核表达载体或克隆载体骨架上。将该打靶载体与含特异性靶向猪ACTB基因下游的CRISPR/Cas9切割载体共转染至猪真核细胞中，实验及测序检测证实该外源基因定点整合至ACTB基因下游。本发明提供的这一打靶位点，可以拓宽外源基因在猪基因组中整合位点的范围，为制备外源基因高效稳定表达的转基因猪奠定基础。
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