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公开(公告)号：CN111323602B
公开(公告)日：2021-09-14
申请号：CN202010178953.2
申请日：2020-03-15
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: G01N33/68 , G01N33/569 , G01N33/543
Abstract: 本发明公开了一种筛选绵羊肺炎支原体和山羊支原体山羊肺炎亚种血清学阴性羊的iELISA方法，包括如下步骤：(1)将山羊支原体山羊肺炎亚种1801菌株接于MTB培养基中扩培后，菌液离心、灭菌、PBS超声重悬，分离得到抗原；(2)用所述抗原包被酶标板，37℃温箱1h后4℃过夜；加入封闭液，37℃封闭2h；加入200倍稀释的血清样品，37℃孵育1h；加入用5％脱脂奶粉稀释5000倍的兔抗羊二抗，37℃孵育1h；(3)用PBST洗板后加入TMB显色液，37℃孵育10min；加入终止液终止反应；酶标仪读取OD450nm值。本发明iELISA方法敏感性可达98％，操作简单，样本处理量大，不仅可用于Mccp和Mo两种病原血清学阴性羊的筛选，还可用于实验中Mccp抗体水平的监测。
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公开(公告)号：CN111235289A
公开(公告)日：2020-06-05
申请号：CN202010178966.X
申请日：2020-03-15
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种用于检测山羊支原体山羊肺炎亚种的特异性PCR引物，本发明首先通过对山羊支原体山羊肺炎亚种基因测序和对比，筛选到用于检测山羊支原体山羊肺炎亚种的靶序列，其基因序列如SEQ ID NO.1所示，然后设计了检测其的特异性PCR引物，可将Mccp与丝状支原体簇其他成员以及常见反刍动物支原体区分开，显示出良好的特异性，可作为新诊断靶标，以此为基础建立更具临床实用性的Mccp诊断技术。
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公开(公告)号：CN110819684A
公开(公告)日：2020-02-21
申请号：CN201910834074.8
申请日：2019-09-04
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12Q1/04
Abstract: 本发明公开一种简单比较山羊支原体山羊肺炎亚种菌株毒力的方法。发明的方法就将等浓度的经复苏的山羊支原体山羊肺炎亚种接种于鸡胚上，再将接种后的鸡胚置于恒温箱内培养，定时检测鸡胚状态及死亡情况，统计各个菌株的鸡胚致死率，以此进行比较判定。本发明的方法具有操作简单、成本低、无需复杂动物饲养条件、实验动物易得、耗时短、重复性好等优点，大大减少动物试验工作量，避免了现有技术实验动物山羊存在价格较为昂贵、个体差异较大且饲养要求较高、试验操作复杂、试验周期长、工作量大等不足。
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公开(公告)号：CN106635895A
公开(公告)日：2017-05-10
申请号：CN201611071308.0
申请日：2016-11-29
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
CPC classification number: C12N1/20 , A61K39/0241
Abstract: 本发明公开了一种绵羊肺炎支原体低血清高效培养基，含有以下组分：MEM、丙酮酸钠、葡萄糖、Hank’s 液、新鲜酵母浸出液、L‑谷氨酰胺、L‑半胱氨酸、水解乳蛋白、小牛胸腺DNA、胰岛素、转铁蛋白、青霉素、马血清、酚红、去离子水；并提供了其制备方法。本发明的有益效果为：本发明提供的绵羊肺炎支原体培养基血清含量仅为5%，是现有技术培养基血清含量的1/4；用本发明方法制备的绵羊肺炎支原体半成品菌液滴度达1010 CCU/ml，明显高于现有技术培养基。低血清高效培养基培养绵羊肺炎支原体，既减轻了异源血清对羊体的过敏应激反应，提高了生物安全，也提高了活菌菌液滴度，降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN106399206A
公开(公告)日：2017-02-15
申请号：CN201611072161.7
申请日：2016-11-29
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
CPC classification number: C12N1/20 , A61K39/0241
Abstract: 本发明公开一种牛支原体培养基及其制备方法。本发明的牛支原体培养基由基础培养基和辅助培养基混合构成，其中培养基的组成为：Friis media premix、丙酮酸钠、新鲜酵母浸出液、葡萄糖、酚红、去离子水、L-谷氨酰胺、L-半胱氨酸、水解乳蛋白、转铁蛋白、胰岛素、青霉素和少量马血清。本发明既能减少血清用量，还明显提高了牛支原体的活菌滴度，为牛支原体优质疫苗的研制奠定了基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN106222109A
公开(公告)日：2016-12-14
申请号：CN201610690169.3
申请日：2016-08-19
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种用于殊异支原体分离培养的培养基，每1000ml培养基中包括有以下组分：PPLO肉汤8.5g、脑心浸出液8.5g、葡萄糖2.0g、Hank’s平衡盐溶液500 ml、25%新鲜酵母浸出液60 ml、无菌猪血清100 ml、无菌马血清100 ml、氨苄青霉素100 mg、10%醋酸铊1 ml；并提供了其制备方法。本发明的有益效果为：本发明提供的殊异支原体培养基与现有技术相比，活菌滴度可达1010 CCU/ml，而现有技术培养基生长滴度为107-109 CCU/ml；继代培养殊异支原体，本发明培养基2-3天可传代一次，而现有技术传代一次一般需要3-5天，充分说明本发明提供的培养基具有生长快速、培养滴度高的特点，适用于殊异支原体的分离培养。
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公开(公告)号：CN104316703B
公开(公告)日：2016-06-01
申请号：CN201410615939.9
申请日：2014-11-05
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: G01N33/68 , G01N33/558
Abstract: 本发明公开一种牛支原体抗体检测试纸条及其制备方法。本发明的试纸条由底板、设置于底板上依次线性排列的样品吸收垫、包被有抗原的胶体金垫、硝酸纤维膜和吸水垫组成，在硝酸纤维素膜上包被有质控线与检测线，其中检测线包被的是山羊抗牛二抗IgG，质控线为兔源P48融合蛋白的多抗IgG。本发明的试纸条可检测牛支原体抗体，包括血清抗体与乳清抗体，并具有成本低，操作简单、方便快速，无需特殊设备和仪器，检测敏感度高，特异性强，应用范围广等优点。
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公开(公告)号：CN101721694B
公开(公告)日：2013-01-30
申请号：CN200910117575.0
申请日：2009-11-07
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: A61K39/116 , A61K39/02 , A61P31/04 , A61P11/00 , C12N1/20
Abstract: 一种山羊支原体肺炎二联灭活疫苗及其制备方法，采用以下方法和步骤制备而成：a制苗用培养基及其制备方法：制苗用培养基为改良KM2培养基；b增殖支原体的程序；c支原体灭活的程序；d疫苗配制程序采用一步乳化法，制成双相油乳剂疫苗；液相成分：占疫苗总量的45～50％，丝状支原体山羊亚种和绵羊肺炎支原体灭活抗原按1∶1混合后，按抗原总量的1％加入1％硫柳汞溶液；油相成分：占疫苗总量的50～55％，ISA206油佐剂；乳化成略带粘滞性的水包油包水型(w/o/w)双相油乳剂灭活苗。本发明首次将这两种优势病原联合制备二联疫苗，可同时预防两种病原，避免了用单一病原制备疫苗顾此失彼的缺点，更适合我国生产实际。
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公开(公告)号：CN102445535A
公开(公告)日：2012-05-09
申请号：CN201110297510.6
申请日：2011-11-15
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: G01N33/558 , G01N33/531
Abstract: 一种山羊接触传染性胸膜肺炎抗体检测试纸条，由PVC衬板、硝酸纤维素膜、吸收垫、金标垫、样品垫组成。硝酸纤维素膜上左端喷有抗山羊支原体山羊肺炎亚种IgG作为质控线，右端喷有山羊支原体山羊肺炎亚种多糖抗原作为检测线；金标垫上喷有胶体金标记山羊支原体山羊肺炎亚种多糖抗原。制备工艺为：a胶体金的制备：采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金；b胶体金标记的山羊支原体山羊肺炎亚种多糖抗原制备；c组装抗体检测试纸条。本发明根据检测线和质控线是否出现色带来确定血清中是否存在山羊接触传染性胸膜肺炎抗体。本试纸条检测简便、快速、准确，适用于基层、流调、隔离检疫和快速检测，便于及时淘汰感染羊，控制病情发生，减少经济损失。
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公开(公告)号：CN101721694A
公开(公告)日：2010-06-09
申请号：CN200910117575.0
申请日：2009-11-07
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: A61K39/116 , A61K39/02 , A61P31/04 , A61P11/00 , C12N1/20
Abstract: 一种山羊支原体肺炎二联灭活疫苗及其制备方法，采用以下方法和步骤制备而成：a制苗用培养基及其制备方法：制苗用培养基为改良KM2培养基；b增殖支原体的程序；c支原体灭活的程序；d疫苗配制程序采用一步乳化法，制成双相油乳剂疫苗；液相成分：占疫苗总量的45～50％，丝状支原体山羊亚种和绵羊肺炎支原体灭活抗原按1∶1混合后，按抗原总量的1％加入1％硫柳汞溶液；油相成分：占疫苗总量的50～55％，ISA206油佐剂；乳化成略带粘滞性的水包油包水型(w/o/w)双相油乳剂灭活苗。本发明首次将这两种优势病原联合制备二联疫苗，可同时预防两种病原，避免了用单一病原制备疫苗顾此失彼的缺点，更适合我国生产实际。
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