金属硫蛋白的制备方法
    34.
    发明授权

    公开(公告)号:CN1141395C

    公开(公告)日:2004-03-10

    申请号:CN01131966.6

    申请日:2001-10-18

    Applicant: 复旦大学

    Abstract: 本发明是一种用蛋白质工程技术高效制备金属硫蛋白的方法。现有技术一直难以得到比较高的产率,虽然融合蛋白表达技术为金属硫蛋白的表达提供了新方法,但是仍存在产率低这个不足之处。本发明用基因工程方法构建金属硫蛋白或其突变体基因的表达质粒,转入大肠杆菌工程菌中培养发酵,诱导后加入金属离子,继续培养,收集菌体。菌体超声破菌、离心后用谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B亲和层析柱静态吸附,柱上凝血酶酶切,再经柱层析脱盐,盐梯度洗脱,收集目标蛋白。本发明方法可得纯度达95%以上的目标蛋白。用本发明方法制备的猴金属硫蛋白I的六个突变体蛋白,产量与纯度均与野生型重组蛋白类似。

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