公开(公告)号：CN102747102A

公开(公告)日：2012-10-24

申请号：CN201210269209.9

申请日：2012-07-31

Applicant: 西北农林科技大学 ,  杨凌科元克隆股份有限公司

Inventor： 罗艳 ,  张涌 ,  刘军 ,  王勇胜 ,  权富生 ,  郭泽坤 ,  余源

IPC: C12N15/85 ,  C12N5/10 ,  C12P21/02 ,  C12N15/873

Abstract: 本发明公开了一种HSA乳腺特异性表达载体及其构建的重组细胞，该载体包括位于启动子下游的目的基因HSA，在HSA基因的5'端连接BCP5序列，在其3'端连接有BGHpolyA序列；在启动子的上游还设有phiC31整合酶特异性识别位点。通过在HSA基因5'端插入牛β-酪蛋白基因的和3'端插入牛生长激素polyA，牛β-酪蛋白基因的5'调控区和BGHpolyA能够指导目的基因在牛的乳腺组织中特异的高效表达。以包含目的基因HSA的牛胎儿成纤维细胞作为核移植构建转基因克隆胚的核供体细胞，通过SCNT获得转基因克隆胚，将这些胚胎移入受体牛的子宫有望生产出转HSA基因的奶牛。

公开(公告)号：CN102628045A

公开(公告)日：2012-08-08

申请号：CN201210100786.5

申请日：2012-04-09

Applicant: 西北农林科技大学 ,  杨凌科元克隆股份有限公司

Inventor： 佟琪 ,  张涌 ,  余源 ,  王勇胜 ,  权富生 ,  苏峰 ,  刘军

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/63 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明公开了一种干扰BVDV复制的shRNA表达载体及构建的重组细胞，针对BVDV的不同区域设计了不同的shRNA片段。shRNA在宿主细胞内转录后经剪切加工后形成siRNA，作用于病毒RNA的不同区域，干扰病毒的复制和表达。由于在牛肾脏细胞、睾丸细胞等存在BVDV细胞表面受体，因此BVDV对胎牛肾脏细胞、睾丸细胞最敏感，那么牛胎儿成纤维细胞做为体细胞核移植的供体细胞，进行诱导重编程之后形成的了转基因克隆牛完整的个体，其肾脏等BVDV敏感器官具有抑制该病毒表达的能力。

公开(公告)号：CN102206609A

公开(公告)日：2011-10-05

申请号：CN201110107772.1

申请日：2011-04-27

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 郑月茂 ,  贺小英 ,  郑艳玲 ,  刘军 ,  张涌

IPC: C12N5/071

Abstract: 本发明公开了一种卵巢来源雌性生殖干细胞的分离培养方法，是以胎儿成纤维细胞作为饲养层，将取自家畜卵巢的表面上皮层的细胞分离、分散后接种，加入雌性生殖干细胞培养液进行分离培养后收集细胞得到雌性生殖干细胞。本发明提供的卵巢来源雌性生殖干细胞的分离培养方法，开辟了分离培养雌性生殖干细胞的新途径，从卵巢中分离培养雌性生殖干细胞成功率高。经PR-PCR检测到相关的干细胞标志物，而且所分离的雌性生殖干细胞具有可行性和有效性。

公开(公告)号：CN101591672B

公开(公告)日：2011-09-07

申请号：CN200910022664.7

申请日：2009-05-22

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 华松 ,  张涌 ,  马晶晶 ,  权富生 ,  王勇胜 ,  刘军 ,  郑月茂

IPC: C12N15/85 ,  C12N5/10 ,  C12N15/06

Abstract: 本发明涉及一种包含hBD3乳腺特异性表达载体的牛胎儿成纤维细胞，包括一种hBD3乳腺特异性表达载体，包含目的基因hBD3，分别在hBD3基因的5′端和3′端插入调控元件；所述的hBD3乳腺特异性表达载体为pEBB表达载体。一种包含目的基因hBD3的牛胎儿成纤维细胞，其宿主细胞为牛胎儿成纤维细胞，通过转染外源性表达载体pEBB，将目的基因hBD3整合到牛胎儿成纤维细胞的基因组。以包含目的基因hBD3的牛胎儿成纤维细胞作为核移植构建转基因克隆胚的核供体细胞，通过SCNT获得转基因克隆胚，将这些胚胎移入受体牛的子宫有望生产出转hBD3基因的奶牛。

公开(公告)号：CN119876039A

公开(公告)日：2025-04-25

申请号：CN202510085252.7

申请日：2025-01-20

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 刘军 ,  唐姣美 ,  周群莉 ,  张涌 ,  祝振亮 ,  韩静

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/867 ,  C12N15/37 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明公开了一种提高乳腺上皮细胞系传代次数的方法及其应用，属于乳腺上皮细胞系技术领域。本发明首次发现将绝缘子‑支架附着区外源性片段HS4‑SAR片段，与p‑Ef1a‑SV40LT‑Puro载体或pEF1a‑eGFP载体连接，转染商业化的永生化细胞系和原代细胞系，均可以显著提高乳腺上皮细胞系的传代次数，传代120代细胞形态仍然正常、未恶性转化、基因表达水平仍然未出现降低的现象，实现了永生化；建成的奶山羊乳腺上皮细胞系仍然具有合成和分泌蛋白的能力；提供的提高乳腺上皮细胞系传代次数的方法，简单易操作，对永生化细胞系和原代细胞系均具有显著的效果，有望提高多种乳腺上皮细胞系的稳定传代的传代次数，降低相关研究的细胞成本。

公开(公告)号：CN118497203A

公开(公告)日：2024-08-16

申请号：CN202410737289.9

申请日：2024-06-07

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 刘军 ,  李艾聪 ,  高元鹏 ,  张涌

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85

Abstract: 本发明公开了RNAmotif序列及其在提高先导编辑效率中的应用，属于基因编辑工具优化技术领域。本发明公开的RNAmotif序列，序列如下：CTTAGCCACTGCACCAGGGAATTCCCTGCCAGCGATTT。本发明的RNAmotif序列在不同细胞，不同位点以及不同的编辑类型，均有效地提高了先导编辑的效率，最高提高3.58倍；且序列较短，便于合成及连接。

公开(公告)号：CN113141797A

公开(公告)日：2021-07-23

申请号：CN202110185742.6

申请日：2021-02-11

Applicant: 西北农林科技大学 ,  北京光辉财智管理咨询有限公司 ,  郓城县工力有限公司

Inventor： 王东 ,  田文升 ,  林祥 ,  黄启娟 ,  刘军 ,  王晓 ,  王会

IPC: A01B49/06

Abstract: 本发明涉及一种精细耕作精准施肥一沟多行单粒精密点播机，属于农业机械与装备领域。它包括悬挂机架，悬挂机架下方由前向后依次设置有反曲剁刀、旋耕刀、深松铲、施肥机构、平面镇压器，平面镇压器的后方依次设置有排种机构、镇压轮和耱；悬挂机架上设置有前后两组排种机构和圆盘开沟器设置，每个排种机构的布种口位于对应的圆盘开沟器的两个圆盘之间；两组排种机构中，相邻的两个排种机构交错分布。本发明功能多、并能实现精细耕作、精准施肥、精密布种，大幅度提高种子分布均匀度，优化了种苗的空间布局，使群体结构合理、个体发育健壮。

公开(公告)号：CN104726495B

公开(公告)日：2018-06-19

申请号：CN201510131862.2

申请日：2015-03-25

Applicant: 西北农林科技大学 ,  杨凌科元克隆股份有限公司

Inventor： 张涌 ,  靳亚平 ,  崔趁趁 ,  刘军 ,  葛恒涛 ,  宋玉洁

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/55 ,  C12N15/12 ,  C12N5/10 ,  C12N15/873

Abstract: 本发明公开了一种基于TALEN介导的基因打靶敲除山羊BLG的载体及重组细胞。本发明根据山羊β‑乳球蛋白基因，设计并构建了针对其第一外显子的TALEN真核表达载体以及含有较短同源臂的BLG基因敲除载体，与以TALEN表达载体为模板体外转录的mRNAs共同转染山羊胎儿成纤维细胞，经药物筛选及鉴定后得到β‑乳球蛋白基因敲除细胞。本发明利用TALEN技术大大提高了基因打靶效率，同时较短同源臂的利用可以更方便高效的进行中靶细胞的筛选，mRNAs的利用则避免了TALEN表达载体在基因组中的随机整合。

公开(公告)号：CN102533857B

公开(公告)日：2014-05-07

申请号：CN201210039495.X

申请日：2012-02-21

Applicant: 西北农林科技大学 ,  杨凌科元克隆股份有限公司

Inventor： 张涌 ,  苏峰 ,  王勇胜 ,  罗艳 ,  余源 ,  李倩 ,  刘军 ,  权富生

IPC: C12N15/85 ,  C12N5/10 ,  C12N15/873

Abstract: 本发明公开了一种包含HBD3气管上皮细胞异性表达载体的牛胎儿成纤维细胞，构建了一种包含HBD3气管上皮细胞异性表达载体Muc1-loxp-EGFP-HBD3，以及基于该载体的包含HBD3气管上皮细胞异性表达载体的牛胎儿成纤维细胞系，利用该细胞系作为核供体细胞，为解决奶牛结核病的转基因奶牛提供坚实的基础。本发明通过电转染法将外源性表达载体Muc1-loxp-EGFP-HBD3导入牛胎儿成纤维细胞，荧光显微镜观察标记基因EGFP的表达情况，并经G418筛选获得阳性细胞，经PCR鉴定，证实目的基因HBD3整合到牛胎儿成纤维细胞的基因组；最后，将转染HBD3基因的牛胎儿成纤维细胞作为核供体移入牛去核卵母细胞，获得转基因克隆胚。

公开(公告)号：CN102426126B

公开(公告)日：2013-04-24

申请号：CN201110251106.5

申请日：2011-08-29

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 苏建民 ,  张涌 ,  刘军

IPC: G01N1/30

Abstract: 本发明公开了一种牛囊胚内细胞团细胞和滋养层细胞的差异染色方法，包括以下步骤：1)利用免疫染色方法，以抗CDX2单克隆抗体作为一抗，将其与特异表达在牛囊胚滋养层细胞的CDX2分子进行免疫结合；2)利用免疫染色方法，以红色荧光标记的能够与抗CDX2单克隆抗体结合的抗体作为二抗，对清洗后的结合有一抗的牛囊胚进行免疫染色；3)在免疫染色完成后，对牛囊胚进行整体的细胞核荧光染色，以形成差异染色。本发明在CDX2蛋白在滋养层细胞内特异性表达，而在内细胞团细胞上不表达的基础上，这样利用基于CDX2分子的红色免疫染色和DAPI细胞核蓝色染色来进行差异染色，准确率为100％，而且图片清晰漂亮。