一种西方蜜蜂MRJP3 C端重组蛋白及其制备方法及其应用

    公开(公告)号:CN115991760A

    公开(公告)日:2023-04-21

    申请号:CN202211483843.2

    申请日:2022-11-24

    Abstract: 本发明提供了一种西方蜜蜂蜂王浆主蛋白3(Major Royal Jelly Protein 3,简称MRJP3)C端重组蛋白及其制备方法和其应用,属于基因工程技术领域。所述西方蜜蜂MRJP3 C端重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示,编码该西方蜜蜂MRJP3 C端重组蛋白的多核苷酸的序列如SEQ ID NO.3所示。本发明还构建了高效表达西方蜜蜂MRJP3 C端重组蛋白的质粒,利用293F细胞生产的西方蜜蜂MRJP3 C端重组蛋白,可促进人永生化角质形成细胞构建的体外伤口模型的愈合,表明本发明提供的西方蜜蜂MRJP3 C端重组蛋白作为促伤口愈合剂具有良好的应用前景。

    一种测量蜜蜂咽下腺单个腺泡面积的方法

    公开(公告)号:CN110763165A

    公开(公告)日:2020-02-07

    申请号:CN201911027754.5

    申请日:2019-10-26

    Abstract: 本发明涉及一种测量蜜蜂咽下腺单个腺泡面积的方法,包括以下步骤:步骤S1:将工蜂头部两侧完整的一对咽下腺,放入PBS缓冲溶液中清洗1~2次;步骤S2:取步骤S1中处理后的咽下腺放入载玻片上,移液器滴入1~2滴考马斯亮蓝染液覆盖咽下腺,染色时间1~2分钟;步骤S3:将步骤S2中染色后的样品放入PBS缓冲液中清洗1~2分钟;步骤S4:将步骤S3中的样品放在干净的载破片上用手术剪刀将咽下腺剪成均匀小段,滴一滴PBS缓冲液充分覆盖样品;步骤S5:获取包括蜜蜂咽下腺单个腺泡的图像;步骤S6:采用像素法计算腺泡面积,用以评估咽下腺分泌蜂王浆的活性。本发明使不具备高精尖设备的普通实验室即可完成腺泡面积的测定,节约成本。

    一种蜜蜂CRISPR-Cas9基因编辑方法

    公开(公告)号:CN110157744A

    公开(公告)日:2019-08-23

    申请号:CN201910510389.7

    申请日:2019-06-13

    Abstract: 本发明涉及一种蜜蜂CRISPR-Cas9基因编辑方法,首先将Cas9蛋白与靶基因gRNA混合成终浓度均为500ng/ul的混合溶液。然后对被产下不超过1.5小时的受精卵进行注射,每颗受精卵的注射体积为1.2nl,蜂卵的显微注射在1小时内完成。接着将完成注射的蜂卵置于恒温恒湿培养箱中培养至孵化成小幼虫,蜂卵的培养条件为温度34.5℃,相对湿度为85%。最后对小幼虫进行移虫育王,得到嵌合体蜂王。本发明以蜜蜂眼色基因white为靶基因,得到有明显表型的嵌合体蜂王,另外,注射后对孵化的小幼虫进行测序,结果表明本发明有90.9%的基因编辑效率。从而建立了在意大利蜜蜂领域中敲除靶基因的基因编辑方法。

    利用SNP标记rs4208349鉴别蜂群王浆高产性状的方法

    公开(公告)号:CN105063202B

    公开(公告)日:2018-02-09

    申请号:CN201510478753.8

    申请日:2015-08-03

    Abstract: 本发明涉及一种利用SNP标记rs4208349鉴别蜂群王浆高产性状的方法,包括蜜蜂个体取样、蜜蜂样本DNA提取、引物合成、PCR检测和鉴别蜂群王浆高产性状,根据从该蜂群中随机收集的工蜂个体在该SNP标记rs4208349出现A等位基因的频率PA和G等位基因的频率PG之间是否存在显著差异,鉴别蜂群王浆高产性状。本发明从分子生物学水平,提供了使用意大利蜜蜂工蜂个体王浆高产相关的SNP(rs4208349)标记科学、准确、快速地鉴别意大利蜜蜂蜂群王浆高产性状,可以大大缩短王浆高产意大利蜜蜂品种的选育周期,加快蜜蜂育种速度。

    利用SNP标记rs16287910鉴别蜂群王浆高产性状的方法

    公开(公告)号:CN104988240B

    公开(公告)日:2017-12-08

    申请号:CN201510478734.5

    申请日:2015-08-03

    Abstract: 本发明涉及一种利用SNP标记rs16287910鉴别蜂群王浆高产性状的方法,包括蜜蜂个体取样、蜜蜂样本DNA提取、合成引物、PCR检测和鉴别蜂群王浆高产性状,根据从该蜂群中随机收集的工蜂个体在SNP标记rs16287910出现T等位基因的频率PT和C等位基因的频率PC之间是否存在显著差异,鉴别蜂群王浆高产性状。本发明从分子生物学水平,提供了使用意大利蜜蜂工蜂个体王浆高产相关的SNP(rs16287910)标记,科学、准确、快速地鉴别意大利蜜蜂蜂群王浆高产性能,可以大大缩短王浆高产意大利蜜蜂的选育周期,加快蜜蜂育种速度。

    利用蜜蜂SsRbeta基因荧光定量PCR技术鉴别蜂王浆产量性能的方法

    公开(公告)号:CN103421901B

    公开(公告)日:2015-07-08

    申请号:CN201310350401.5

    申请日:2013-08-13

    Abstract: 本发明涉及一种利用蜜蜂SsRbeta基因荧光定量PCR技术鉴别蜂王浆产量性能的方法,包括蜜蜂样本采集、蜜蜂头部RNA提取、蜜蜂头部cDNA合成、引物设计、qRT-PCR反应体系和条件,以及蜂王浆产量性能鉴别。本发明从分子生物学高度,针对蜂王浆生产受蜂群群势、蜜源、环境、气候等条件影响巨大的问题,提供了能够更科学、准确地鉴别蜂群的王浆产量性能优劣的荧光定量PCR方法,可以大大缩短蜂王浆生产性状考察周期,加快蜜蜂育种速度,降低蜂王浆生产性状考察的成本和育种成本,还能减轻田间蜂王浆产量性能考察的工作强度。

    利用SNP标记鉴别蜂群抗白垩病性状的方法

    公开(公告)号:CN104498608A

    公开(公告)日:2015-04-08

    申请号:CN201410793151.7

    申请日:2014-12-20

    CPC classification number: C12Q1/6888 C12Q2600/124 C12Q2600/156

    Abstract: 本发明涉及一种利用SNP标记鉴别蜂群抗白垩病性状的方法,包括从要考察意大利蜂群中收集幼虫样本、幼虫DNA提取、合成目的引物、以提取的每个个体DNA为模版进行PCR、将PCR产物进行电泳检测后再测序、最后将获得的测序结果比对分析,根据从该蜂群中随机收集的幼虫个体在该SNP标记C2587245T出现C等位基因的频率PC和T等位基因的频率PT之间是否存在差异鉴别蜂群抗白垩病性状。本发明从分子生物学水平,针对意大利蜜蜂蜂群受白垩病影响严重的问题,提供了使用意大利蜜蜂幼虫抗白垩病相关的SNP(C2587245T)标记能够科学、准确、快速地鉴别意大利蜜蜂蜂群抗白垩病性能强弱,可以大大缩短意大利蜜蜂抗白垩病育种的选育周期,加快蜜蜂育种速度,降低白垩病发生对养蜂业造成的损失。

    利用蜜蜂Gmap基因荧光定量PCR技术鉴别蜂王浆产量性能的方法

    公开(公告)号:CN103409530A

    公开(公告)日:2013-11-27

    申请号:CN201310350729.7

    申请日:2013-08-13

    Abstract: 本发明涉及一种利用蜜蜂Gmap基因荧光定量PCR技术鉴别蜂王浆产量性能的方法,包括蜜蜂样本采集、蜜蜂头部RNA提取、蜜蜂头部cDNA合成、引物设计、qRT-PCR反应体系和条件,以及蜂王浆产量性能鉴别。本发明从分子生物学高度,针对蜂王浆生产受蜂群群势、蜜源、环境、气候等条件影响巨大的问题,提供了能够更科学、准确地鉴别蜂群的王浆产量性能优劣的荧光定量PCR方法,可以大大缩短蜂王浆生产性状考察周期,加快蜜蜂育种速度,降低蜂王浆生产性状考察的成本和育种成本,还能减轻田间蜂王浆产量性能考察的工作强度。

    利用蜜蜂SCHtp-1基因荧光定量PCR技术鉴别蜂王浆产量性能的方法

    公开(公告)号:CN103409529A

    公开(公告)日:2013-11-27

    申请号:CN201310350701.3

    申请日:2013-08-13

    Abstract: 本发明涉及一种利用蜜蜂SCHtp-1基因荧光定量PCR技术鉴别蜂王浆产量性能的方法,包括蜜蜂样本采集、蜜蜂头部RNA提取、蜜蜂头部cDNA合成、引物设计、qRT-PCR反应体系和条件,以及蜂王浆产量性能鉴别。本发明从分子生物学高度,针对蜂王浆生产受蜂群群势、蜜源、环境、气候等条件影响巨大的问题,提供了能够更科学、准确地鉴别蜂群的王浆产量性能优劣的荧光定量PCR方法,可以大大缩短蜂王浆生产性状考察周期,加快蜜蜂育种速度,降低蜂王浆生产性状考察的成本和育种成本,还能减轻田间蜂王浆产量性能考察的工作强度。

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