公开(公告)号：CN110157744A

公开(公告)日：2019-08-23

申请号：CN201910510389.7

申请日：2019-06-13

Applicant: 福建农林大学

Inventor： 苏松坤 ,  聂红毅 ,  耿海洋 ,  张猛

IPC: C12N15/89 ,  C12N15/90 ,  A01K67/033

Abstract: 本发明涉及一种蜜蜂CRISPR-Cas9基因编辑方法，首先将Cas9蛋白与靶基因gRNA混合成终浓度均为500ng/ul的混合溶液。然后对被产下不超过1.5小时的受精卵进行注射，每颗受精卵的注射体积为1.2nl，蜂卵的显微注射在1小时内完成。接着将完成注射的蜂卵置于恒温恒湿培养箱中培养至孵化成小幼虫，蜂卵的培养条件为温度34.5℃，相对湿度为85%。最后对小幼虫进行移虫育王，得到嵌合体蜂王。本发明以蜜蜂眼色基因white为靶基因，得到有明显表型的嵌合体蜂王，另外，注射后对孵化的小幼虫进行测序，结果表明本发明有90.9%的基因编辑效率。从而建立了在意大利蜜蜂领域中敲除靶基因的基因编辑方法。

公开(公告)号：CN107258703B

公开(公告)日：2019-12-13

申请号：CN201710703765.5

申请日：2017-08-16

Applicant: 福建农林大学

Inventor： 苏松坤 ,  耿海洋 ,  聂红毅 ,  张猛

IPC: A01K67/033

Abstract: 本发明涉及一种用于显微注射的蜜蜂卵移取方法，首先利用蜂王产卵的生物学特性进行限王产卵，然后利用蜂卵直立黏在巢房底部的特点以及蜂蜡的粘性，用移虫针铲出蜂卵底部的蜂蜡，将其粘在巢础条上。本发明对大量取自1小时内蜂卵进行转移，取得孵化率达94%的效果，解决了1小时内蜂卵孵化率低的难题，提供了一种高效移取蜜蜂卵的方法。可以无伤害转移大量1小时内的蜂卵，为蜜蜂基因组编辑技术在蜜蜂育种领域中的应用提供方法支持。

公开(公告)号：CN107258703A

公开(公告)日：2017-10-20

申请号：CN201710703765.5

申请日：2017-08-16

Applicant: 福建农林大学

Inventor： 苏松坤 ,  耿海洋 ,  聂红毅 ,  张猛

IPC: A01K67/033

Abstract: 本发明涉及一种用于显微注射的蜜蜂卵移取方法，首先利用蜂王产卵的生物学特性进行限王产卵，然后利用蜂卵直立黏在巢房底部的特点以及蜂蜡的粘性，用移虫针铲出蜂卵底部的蜂蜡，将其粘在巢础条上。本发明对大量取自1小时内蜂卵进行转移，取得孵化率达94%的效果，解决了1小时内蜂卵孵化率低的难题，提供了一种高效移取蜜蜂卵的方法。可以无伤害转移大量1小时内的蜂卵，为蜜蜂基因组编辑技术在蜜蜂育种领域中的应用提供方法支持。