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公开(公告)号：CN102212579B
公开(公告)日：2013-08-14
申请号：CN201110110318.1
申请日：2011-04-28
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种酵母展示脂肪酶催化合成葡萄糖豆蔻酸酯的方法，包括：将葡萄糖和豆蔻酸溶于有机溶剂中，加入酵母展示脂肪酶，于50～60℃反应10～14小时，分离、纯化制得葡萄糖豆蔻酸酯；将经线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72～144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母展示脂肪酶；本发明通过将脂肪酶展示在细胞外，利用该酶制剂催化合成葡萄糖豆蔻酸酯，不仅提高了转化效率，而且缩短了反应时间，降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN102212577B
公开(公告)日：2013-08-14
申请号：CN201110108816.2
申请日：2011-04-28
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种酵母展示脂肪酶催化合成维生素E琥珀酸酯的方法，包括：将维生素E和琥珀酸酐溶于有机溶剂中，加入酵母展示脂肪酶，无氧条件下于50～60℃反应10～14小时，分离、纯化制得维生素E琥珀酸酯；将经线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichiapastoris)GS115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72～144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母展示脂肪酶；本发明通过将脂肪酶展示在细胞外，利用该酶制剂催化合成维生素E琥珀酸酯，不仅提高了转化效率，而且缩短了反应时间，降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN102212573B
公开(公告)日：2013-08-14
申请号：CN201110110322.8
申请日：2011-04-28
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种酵母展示脂肪酶催化合成L-抗坏血酸DHA酯的方法，包括：将L-抗坏血酸和DHA溶于有机溶剂中，加入酵母展示脂肪酶，无氧条件下于50～60℃反应4～8小时，分离、纯化制得L-抗坏血酸DHA酯；将经线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72～144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母展示脂肪酶；本发明通过将脂肪酶展示在细胞外，利用该酶制剂催化合成L-抗坏血酸DHA酯，不仅提高了转化效率，而且缩短了反应时间，降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN102212571B
公开(公告)日：2013-08-14
申请号：CN201110108792.0
申请日：2011-04-28
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种酵母展示脂肪酶催化合成L-抗坏血酸EPA酯的方法，包括：将L-抗坏血酸和EPA溶于有机溶剂中，加入酵母展示脂肪酶，无氧条件下于50～60℃反应4～8小时，分离、纯化制得L-抗坏血酸EPA酯；将经线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72～144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母展示脂肪酶；本发明通过将脂肪酶展示在细胞外，利用该酶制剂催化合成L-抗坏血酸EPA酯，不仅提高了转化效率，而且缩短了反应时间，降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN102212570B
公开(公告)日：2013-08-14
申请号：CN201110108725.9
申请日：2011-04-28
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种酵母展示脂肪酶催化合成维生素C共轭亚油酸酯的方法，包括：将L-抗坏血酸和共轭亚油酸溶于有机溶剂中，加入酵母展示脂肪酶，无氧条件下于50～60℃反应4～8小时，分离、纯化制得L-抗坏血酸共轭亚油酸酯；将经线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72～144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母展示脂肪酶；本发明通过将脂肪酶展示在细胞外，利用该酶制剂催化合成L-抗坏血酸共轭亚油酸酯，不仅提高了转化效率，而且缩短了反应时间，降低了生产成本。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102212593B
公开(公告)日：2013-07-31
申请号：CN201110110339.3
申请日：2011-04-28
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种酵母展示脂肪酶催化合成麦芽糖硬脂酸酯的方法，包括：将麦芽糖和硬脂酸溶于有机溶剂中，加入酵母展示脂肪酶，于50～60℃反应10～14小时，分离、纯化制得麦芽糖硬脂酸酯；将经线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72～144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母展示脂肪酶；本发明通过将脂肪酶展示在细胞外，利用该酶制剂催化合成麦芽糖硬脂酸酯，不仅提高了转化效率，而且缩短了反应时间，降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN102321596A
公开(公告)日：2012-01-18
申请号：CN201110260328.3
申请日：2011-09-05
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种酵母展示型脂肪酶协同超声波破碎紫菜细胞的方法，包括：将紫菜干粉、酵母展示型脂肪酶加入水中混匀，35～37℃下酶解反应30～45min后于30～32℃下利用功率为730～750W的超声波破碎65～70min；本发明还公开了一种提取紫菜蛋白和紫菜多糖的方法，将上述紫菜细胞破碎后的细胞破碎液分离即可；本发明还公开了一种制备紫菜降血压肽的方法，即将分离的紫菜蛋白利用蛋白酶在在36～37℃下酶解反应130～133min即可。本发明的方法利用酵母展示脂肪酶对紫菜细胞的细胞膜进行降解并协同超声波处理，高效破碎紫菜细胞，提高紫菜细胞破碎率，增加紫菜多糖、紫菜蛋白和紫菜降血压肽的得率。
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公开(公告)号：CN102242096A
公开(公告)日：2011-11-16
申请号：CN201010172808.X
申请日：2010-05-14
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明的一种提高β葡聚糖酶活性的方法，包括以下步骤：将β葡聚糖酶基因连接在酿酒酵母细胞壁成份α凝集素序列的N端，然后插入酿酒酵母表达载体GAL1启动子下游MFα1信号肽序列的C端，构建成表达框，表达框从N端到C端：GAL1启动子+MFα1信号肽序列+β葡聚糖酶基因+α凝集素序列；将包含该表达框的酵母质粒转化入酿酒酵母细胞。本发明的优点：将β葡聚糖酶展露表达在酿酒酵母细胞壁外表面，实现酶与细胞外底物的完全接触，从而显著提高β葡聚糖酶活性。
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公开(公告)号：CN102242087A
公开(公告)日：2011-11-16
申请号：CN201010172850.1
申请日：2010-05-14
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明的一种提高脂肪酶活力持续性的方法，包括以下步骤：将脂肪酶基因(Genbank号：AF229435)连接(常规方法)在酿酒酵母细胞壁成份FLO序列(Genbank号：S73336)的N端，然后插入(常规方法)酿酒酵母表达载体GAL1启动子(Genbank号：AY428072)下游MFα1信号肽序列(Genbank号：M17301)的C端，构建成表达框，表达框从N端到C端：GAL1启动子+MFα1信号肽序列+脂肪酶基因+FLO序列；将包含该表达框的酵母质粒转化入酿酒酵母细胞。本发明的优点：将脂肪酶与酿酒酵母细胞壁成分FLO连接，如此则只要酿酒酵母细胞保持存活状态，脂肪酶即可保持活力。
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公开(公告)号：CN102226209A
公开(公告)日：2011-10-26
申请号：CN201110108739.0
申请日：2011-04-28
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种酵母展示脂肪酶催化合成维生素E油酸酯的方法，包括：将维生素E和油酸溶于有机溶剂中，加入酵母展示脂肪酶，无氧条件下于50～60℃反应10～14小时，分离、纯化制得维生素E油酸酯；将经线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72～144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母展示脂肪酶；本发明通过将脂肪酶展示在细胞外，利用该酶制剂催化合成维生素E油酸酯，不仅提高了转化效率，而且缩短了反应时间，降低了生产成本。
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