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公开(公告)号：CN102690890B
公开(公告)日：2013-12-04
申请号：CN201210203445.0
申请日：2012-06-19
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明公开了湖羊母性行为分子标记辅助选择方法及引物。该方法是检测湖羊PRLR基因外显子10的第284位和第339位核苷酸为C还是突变为T，确定湖羊的基因型，再通过基因型对湖羊母性行为进行选择；若第284位和339位均为C时，其纯合体的基因型为AA；若均为T时，其纯合体基因型为BB；它们的杂合体基因型为AB；对于舔舐、哺乳行为AA基因型的多于AB基因型，AB基因型的多于BB基因型；对于踩踏行为和拒绝哺乳则AA基因型的低于AB基因型，AB基因型的低于BB基因型。本发明的方法利用遗传标记多态性评价湖羊母性行为，可简便、迅速地检测湖羊母性，为评价湖羊母性行为提供了一个简便准确的方法。
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公开(公告)号：CN119875997A
公开(公告)日：2025-04-25
申请号：CN202411857778.4
申请日：2024-12-17
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N5/0735 , A61K38/30 , A61P15/08
Abstract: 本发明公开了IGF‑1替代胰岛素在促进鸡原始生殖细胞增殖中的应用。本发明通过IGF‑1替代胰岛素在促进鸡原始生殖细胞增殖中发挥作用，可以明确PI3K‑AKT信号通路是PGCs增殖所必需的，为其他信号通路小分子研究提供理论基础。
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公开(公告)号：CN119307442A
公开(公告)日：2025-01-14
申请号：CN202411576221.3
申请日：2024-11-06
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N5/0735
Abstract: 本发明公开了一种促进鸡原始生殖细胞增殖的无鸡血清培养基及其应用，所述培养基中采用卵转铁蛋白代替鸡血清。本发明公开了一种采用卵转铁蛋白代替PGCs培养体系中鸡血清的作用，可以保持PGCs自我更新，从而为探究稳定的培养体系提供依据；本发明培养基可以避免鸡血清成分不明确造成的不良影响，对各种生长因子的精确使用可提供更佳的培养条件，且降低了培养成本。
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公开(公告)号：CN113671194B
公开(公告)日：2024-12-10
申请号：CN202110965416.7
申请日：2021-08-23
Applicant: 扬州大学
IPC: G01N33/68
Abstract: 本发明涉及一种筛选鸡目的蛋白互作转录因子的方法，本方法适用于建立4.5d鸡胚生殖嵴的cDNA文库，筛选已知基因的互作蛋白。可大量捕捉获得和PGCs形成相关的转录因子，完善相应的信号通路，绘制PGCs的形成调控网络，为大量体外诱导获取PGCs奠定实验数据和理论基础。该方法成本低、易操作、高通量、可达到全基因组水平，弥补了其他探讨蛋白互作方式的不准确性和不全面性，为后期深入探究新蛋白的功能、研究蛋白与蛋白的互作依赖关系等进行铺垫。适用于建立4.5d鸡胚生殖嵴的cDNA文库，筛选已知基因的互作蛋白。采用本方法，可大量捕捉获得和PGCs形成相关的转录因子，完善相应的信号通路，绘制PGCs的形成调控网络，为大量体外诱导获取PGCs奠定实验数据和理论基础。
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公开(公告)号：CN119020269A
公开(公告)日：2024-11-26
申请号：CN202410927512.6
申请日：2024-07-11
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N5/0735 , C12Q1/02
Abstract: 本发明公开一种研究类泛素化修饰调节鸡原始生殖细胞特性的方法，包括：采用VII‑31和MLN4924处理PGCs；PGCs生物学特性的检测。本发明方法简便高效、特异性强，填补了类泛素化修饰对鸡PGCs特性调节作用研究的空白，为体外长期维持鸡PGCs的生物学特性提供理论基础，以期在体外培养扩增解决体外获取数量不足的问题进而更好地实现鸡PGCs的高效利用；解决缺乏研究类泛素化修饰调节鸡PGCs特性的问题，为制定鸡PGCs体外长期培养扩增方案提供研究基础；采用本方法，可研究类泛素化修饰对鸡PGCs特性的调节作用，便于深入研究鸡PGCs生物学特性维持机制，为PGCs的发生机制研究和具体应用作铺垫。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN118892113A
公开(公告)日：2024-11-05
申请号：CN202410933465.6
申请日：2024-07-12
Applicant: 扬州大学
IPC: A01N1/02 , C12N5/0735
Abstract: 本发明公开了鸡胚胎期性腺的冷冻保护液、冻存及原始生殖细胞分离培养方法，涉及畜牧学和生物技术领域。冷冻保护液包括A液和B液；其中，A液包括：胎牛血清、CO2独立培养基和GlutaMAX，且胎牛血清、CO2独立培养基和GlutaMAX的体积比为80～90:10～20:1；B液包括：A液和二甲基亚砜，且A液和二甲基亚砜的体积比为4～6:1。冻存及原始生殖细胞分离培养方法包括：鸡胚性腺的获取；鸡胚性腺的冻存；鸡胚性腺的复苏；原始生殖细胞的分离培养。本发明可以将鸡胚胎期性腺冻存后，在合适的时间和地点再进行复苏，对性腺中的PGCs进行培养建系，且冻存、复苏和PGCs建系的效率高，获得的PGCs细胞系依然保持PGCs的生物学特性。
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公开(公告)号：CN117683813A
公开(公告)日：2024-03-12
申请号：CN202311701086.6
申请日：2023-12-12
Applicant: 扬州大学 , 江苏省家禽科学研究所
Abstract: 本发明提供了DF‑1细胞中EE0.6位点敲除载体和NC_006127.4位点敲除载体，属于基因编辑技术领域。本发明通过设计靶向EE0.6序列的sgRNA和靶向NC_006127.4位点的sgRNA，设计oligo引物，将双链oligo与PX458质粒、PX461连接，获得不同的重组质粒，本发明还制备了双sgRNA敲除载体，并将不同的重组质粒导入DF‑1细胞中，获得了不同的EE0.6位点和NC_006127.4的敲除载体，并进行了敲除效率验证。结果表明，DF‑1细胞中EE0.6位点敲除载体以及NC_006127.4位点敲除载体构建成功，为DF‑1细胞外源靶基因高效整合奠定了基础。
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公开(公告)号：CN116926094A
公开(公告)日：2023-10-24
申请号：CN202310891900.9
申请日：2023-07-20
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明公开一种靶向敲除鸡TOP1基因的方法，属于基因编辑技术领域，该方法基于PX458空载载体进行，首先，设计靶向敲除TOP1基因的TOP1‑sgRNA序列，构建TOP1‑sgRNA‑PX458载体，将TOP1‑sgRNA‑PX458载体转染进入待敲除细胞中，能够在PX458载体Cas9蛋白及设计的sgRNA的作用下，靶向敲除TOP1基因，以此达到靶向敲除TOP1基因的作用，本发明为鸡的遗传研究和育种改良提供了全新的视角和策略，通过此方法有望为育种繁殖研究领域填补空白，并为鸡的育种改良提供有力的工具，对于推动鸡的遗传研究和育种改良具有重要意义。
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公开(公告)号：CN116042715A
公开(公告)日：2023-05-02
申请号：CN202310028001.6
申请日：2023-01-09
Applicant: 扬州大学 , 江苏省家禽科学研究所
IPC: C12N15/85
Abstract: 本发明提供了一种鸡TDRD1基因启动子区域组蛋白甲基化水平的调控方法，属于基因编辑技术领域。本发明的方法包括如下步骤：(1)设计并扩增得到靶向鸡TDRD1基因启动子区域的sgRNA；(2)将酶切后的dCas9‑LSD1载体与步骤(1)的sgRNA连接，得到具有靶向性的dCas9‑LSD1打靶载体；(3)将所述dCas9‑LSD1打靶载体转染入细胞中，来调控鸡TDRD1基因启动子区域组蛋白甲基化水平。本发明构建的dCas9‑LSD1打靶载体可以作用于特定基因局部的启动子区位点，可以调控区域性的组蛋白甲基化水平，还可以明确在鸡SSC发育过程中组蛋白甲基化修饰区域。
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公开(公告)号：CN113278686A
公开(公告)日：2021-08-20
申请号：CN202110651752.4
申请日：2021-06-11
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种研究DNA甲基化调控重编程过程的方法，包括以下步骤：步骤（1）、在山中因子Oct4、Sox2、Klf4及c‑Myc诱导的基础上添加DNA甲基化酶抑制剂5’aza，按照山中伸弥提供的诱导方法对体细胞进行诱导，在不同诱导天数观察细胞形态；步骤（2）、当观察到出现细胞克隆时收集细胞进行荧光定量检测、间接免疫荧光检测、碱性磷酸酶染色、染色体核型分析和edu增殖检测；步骤（3）、确定5’aza的效果后，将四因子和5’aza分别进行组合处理体细胞进行诱导，检测ips克隆的形成，确定最有效的组合形式。通过本发明，通过山中因子和DNA甲基化抑制剂5’aza的不同组合诱导，探明DNA甲基化在体细胞重编程诱导中的作用。
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