公开(公告)号：CN117683813A

公开(公告)日：2024-03-12

申请号：CN202311701086.6

申请日：2023-12-12

申请人： 扬州大学 ,  江苏省家禽科学研究所

发明人： 靳锴 ,  孙国兴 ,  梁佑臣 ,  薛倩 ,  韩威 ,  左其生 ,  牛英杰 ,  陈国宏 ,  李碧春

IPC分类号： C12N15/85 ,  C12N15/64 ,  C12N5/10

摘要： 本发明提供了DF‑1细胞中EE0.6位点敲除载体和NC_006127.4位点敲除载体，属于基因编辑技术领域。本发明通过设计靶向EE0.6序列的sgRNA和靶向NC_006127.4位点的sgRNA，设计oligo引物，将双链oligo与PX458质粒、PX461连接，获得不同的重组质粒，本发明还制备了双sgRNA敲除载体，并将不同的重组质粒导入DF‑1细胞中，获得了不同的EE0.6位点和NC_006127.4的敲除载体，并进行了敲除效率验证。结果表明，DF‑1细胞中EE0.6位点敲除载体以及NC_006127.4位点敲除载体构建成功，为DF‑1细胞外源靶基因高效整合奠定了基础。

公开(公告)号：CN112553258A

公开(公告)日：2021-03-26

申请号：CN202110026484.7

申请日：2021-01-08

申请人： 扬州大学

发明人： 李碧春 ,  王佳琪 ,  王美瑰 ,  孙国兴 ,  袁霞 ,  左其生

IPC分类号： C12N15/867 ,  C12N15/12 ,  C12N5/10 ,  A01K67/027

摘要： 一种鸡成纤维细胞转分化为原始生殖细胞介导生产转基因鸡的方法，属于生物技术领域。通过OCT4,SOX2,NANOG,LIN28A诱导鸡CEF重编程为iPS；通过BMP4/BMP8b/EGF诱导鸡iPS分化为iPGC；鸡iPGC血管注射介导转基因鸡生产。本发明的实验方法不仅在家禽上种质资源保护过程中可行，在脊椎动物的其他研究领域也可应用。这一发明将为体外诱导的PGC‑like细胞介导后代鸡的生产研究提供更多的理论基础和技术支撑，也有利于对禽类种质资源进行保护和利用，同时也有利于转基因鸡的生产研究。