山羊痘正向间接血凝诊断试剂的制备方法及检测方法

    公开(公告)号:CN102253198A

    公开(公告)日:2011-11-23

    申请号:CN201110188925.X

    申请日:2011-07-07

    Applicant: 贵州大学

    Abstract: 本发明公开了一种能够检测山羊痘抗体的山羊痘正向间接血凝诊断试剂及其制备方法、检测方法。制备方法为:以戊二醛和绵羊红细胞混合制备红细胞悬液,与等量的纯化山羊痘病毒混合,经搅拌、离心、洗涤,用含1%新生犊牛血清的PBS配成1%致敏红细胞,即制成为山羊痘正向间接血凝诊断试剂。经优化的制备条件是:采用戊二醛单醛化法固定红细胞,致敏红细胞浓度0.8%~1.0%,抗原含量控制在20μg.mL-1~200μg.mL-1之间,可以达到较好的致敏效果;检测方法按常规正向间接血凝试验方法进行,反应温度20~25℃,反应时间50min。该方法具有较好的特异性、敏感性和可重复性,可用于兽医临床上山羊痘抗体快速检测。

    一种多病原羊支原体肺炎核酸疫苗的构建方法

    公开(公告)号:CN113430214A

    公开(公告)日:2021-09-24

    申请号:CN202110694553.1

    申请日:2021-06-22

    Applicant: 贵州大学

    Abstract: 本发明公开了一种多病原羊支原体肺炎核酸疫苗的构建方法,包括以下步骤:步骤一:Mo/Mmc基因组的提取;步骤二:MoP113/MmcLppA基因获取;步骤三:pVAX1‑P113‑LppA共表达载体的构建及在哺乳动物细胞中的表达。本发明在前期筛选出的羊肺炎支原体多表位抗原基因MoP113和MmcLppA基础上,通过基因工程方法构建出pVAX1‑P113‑LppA共表达载体,应用间接免疫荧光技术验证重组质粒在MDBK中的表达情况;本发明选择两个不同抗原基因研制出核酸疫苗,可有效针对Mo和Mmc感染引起的羊支原体肺炎提供免疫保护作用,解决目前疫苗研发所面临的诸多问题。

    一种基于MoHsp70蛋白的间接ELISA试剂盒及使用方法

    公开(公告)号:CN104597249A

    公开(公告)日:2015-05-06

    申请号:CN201510019996.5

    申请日:2015-01-15

    Applicant: 贵州大学

    CPC classification number: G01N33/68

    Abstract: 本发明公开了一种基于Mo Hsp70 蛋白的间接ELISA试剂盒及使用方法。基于Mo Hsp70蛋白的间接ELISA试剂盒原料及配方为:包被Mo Hsp70 蛋白的酶标板、Mo标准阳性和标准阴性血清、酶标二抗、50×PBST缓冲液、封闭缓冲液、底物液A、底物液B和终止液。本发明能检测羊血清Mo Hsp70蛋白抗体,将为Mo引起的山羊和绵羊间质性肺炎的早期监测、疫苗免疫效果评价及相关研究工作提供关键技术,对本病原所致疫病的早发现早防控具有重要意义。

    一种基于GPVP32蛋白的间接ELISA试剂盒及制备方法

    公开(公告)号:CN102353792A

    公开(公告)日:2012-02-15

    申请号:CN201110188936.8

    申请日:2011-07-07

    Applicant: 贵州大学

    Abstract: 本发明公开了一种基于GPVP32蛋白的iELISA试剂盒及制备方法,其组成包括:50~200μL重组蛋白包被、50~200μL阳性对照、50~200μL阴性对照、50~200μL封闭液、50~200μL酶标二抗、50~200μL底物液、50~200μL终止液和25mL-100mL洗涤液。本发明对养羊场山羊痘疫苗免疫提供一种有效评价手段,减少生产中疫苗免疫的盲目性,降低生产成本。

    一种基于PRRSVGP5蛋白的iELISA试剂盒及制备方法

    公开(公告)号:CN102353778A

    公开(公告)日:2012-02-15

    申请号:CN201110189010.0

    申请日:2011-07-07

    Applicant: 贵州大学

    Abstract: 本发明公开了一种基于PRRSVGP5蛋白的iELISA试剂盒及制备方法,其组成包括:重组蛋白包被50~200μL、包被缓冲液25mL-40mL、酶标二抗300-500μL、1×PBST缓冲液800mL-1000mL、阳性对照1mL、阴性对照1mL、封闭缓冲液25mL-40mL、底物液A10mL-15mL、底物液B10mL-15mL和终止液10mL-15mL。本发明能监测猪血清PRRSVGP5蛋白抗体,将为PRRS疫苗免疫效果的评价,提供一种更加客观和有效的指标,减少了生产中PRRS疫苗免疫的盲目性,为PRRS的免疫防控提供技术支撑。

    MDV TaqMan荧光定量PCR检测方法及组合物

    公开(公告)号:CN116970740A

    公开(公告)日:2023-10-31

    申请号:CN202310840712.3

    申请日:2023-07-10

    Applicant: 贵州大学

    Abstract: 本发明属于生物病原体检测技术领域,具体涉及一种MDV TaqMan荧光定量PCR检测方法及组合物。该组合物组合物含有用于检测马立克病病毒的引物和探针,具体包括,核苷酸序列依次如SEQ ID NO:1‑3所示的上游引物、下游引物和探针。该检测方法为:提取待测样本的DNA,以所述DNA为模板,采用序列如SEQ ID NO:1‑3所示的引物和探针进行PCR扩增,根据测得的Ct值对待测样本进行定性和/或定量检测。本发明基于MDV序列保守区设计特异性引物,在通过构建标准品质粒,绘制标准曲线,建立操作简易、敏感性高、重复性好、特异性强的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,可以实现MDV的有效检测。

    MDV TaqMan荧光定量PCR检测方法及组合物

    公开(公告)号:CN116334316A

    公开(公告)日:2023-06-27

    申请号:CN202310511276.5

    申请日:2023-05-08

    Applicant: 贵州大学

    Abstract: 本发明属于生物病原体检测技术领域,具体涉及一种MDV TaqMan荧光定量PCR检测方法及组合物。该组合物组合物含有用于检测马立克病病毒的引物和探针,具体包括,核苷酸序列依次如SEQ ID NO:1‑3所示的上游引物、下游引物和探针。该检测方法为:提取待测样本的DNA,以所述DNA为模板,采用序列如SEQ ID NO:1‑3所示的引物和探针进行PCR扩增,根据测得的Ct值对待测样本进行定性和/或定量检测。本发明基于MDV序列保守区设计特异性引物,在通过构建标准品质粒,绘制标准曲线,建立操作简易、敏感性高、重复性好、特异性强的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,可以实现MDV的有效检测。

    一种消减水体中耐药基因mcr-1的方法及其应用

    公开(公告)号:CN113880226A

    公开(公告)日:2022-01-04

    申请号:CN202111354647.0

    申请日:2021-11-16

    Applicant: 贵州大学

    Abstract: 本发明公开了一种消减水体中耐药基因mcr‑1的方法及其应用,该方法包括以下步骤:将高铁酸钾加入至水体中,在40‑60℃的条件下反应5‑30min即可;水体中耐药基因mcr‑1的绝对丰度与高铁酸钾的比例为(5×106‑7×106)copies/mL:2.126mg;水体的pH控制为5‑9。本发明提供的方法能够有效的对养殖废水等水体中的mcr‑1基因进行消减,有利于减少mcr‑1基因在环境中的污染和扩散,保障多粘菌素类药物治疗革兰氏阴性耐药菌感染的“最后一道防线”地位,从而保护人类的健康与安全。

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