一种适合毕赤酵母高表达的基因序列优化方法

    公开(公告)号:CN112270956A

    公开(公告)日:2021-01-26

    申请号:CN202011153706.3

    申请日:2020-10-26

    Abstract: 本发明公开了一种适合毕赤酵母高表达的基因序列优化方法,包括以下步骤:1)将要表达的蛋白质序列读入后进行处理;2)根据密码子先后组合权重,建立密码子转换矩阵;3)定义图G,其中根据要表达的蛋白质序列含有的氨基酸数量n,图G分为n层,每一层的节点都有一条边连接到下一层的节点;4)设计最大权重数组Max Weight[i,j];5)从图G的倒数第二层开始向图G的第一层遍历,初始化当前层i层MaxWeight[i,j]为负值,并更新当前层的MaxWeight元素;6)从图G的第一层向最后一层进行遍历,通过已经计算好的MaxWeight[i,j],输出具有最大权值的密码子组合,即优化序列。本发明通过毕赤酵母密码子对偏好性对基因序列进行优化,充分解决了最优化序列候选路径呈指数增长的问题。

    一种旧珍珠翻新的方法
    12.
    发明授权

    公开(公告)号:CN105284673B

    公开(公告)日:2018-03-27

    申请号:CN201510304841.6

    申请日:2015-06-07

    CPC classification number: Y02A40/81

    Abstract: 本发明公开一种旧珍珠翻新的方法,先去旧珍珠表面的污渍,再去其表面变性的珍珠层,漂白其表层,之后在其表面覆盖一层适合细胞在其中生长的可降解高分子聚合物组织工程支架,组织工程支架为一个能容纳细胞在其中分裂生长的立体网络空间,将取自育珠蚌的外套膜游离细胞与粘附了组织工程支架的旧珍珠一起体外培养,使细胞在旧珍珠表面的组织工程支架中贴附、分裂、生长,再将旧珍珠插入育珠蚌的插核位置,在蚌壳上刻上相关标记,套上网眼孔径比珍珠直径小的网袋,采用常规的育珠蚌养殖方法养殖,按约定的时间采蚌取珠,既能使珍珠长期保持其表面光泽,也可保护珍珠的内部结构,从而可使一些珍贵的珍珠得以永久保存,适合有纪念意义珍珠的长期保存。

    重组人骨形成蛋白4和7在甲醇酵母中的高效表达

    公开(公告)号:CN1513979A

    公开(公告)日:2004-07-21

    申请号:CN03136581.7

    申请日:2003-05-20

    Abstract: 本发明涉及应用甲醇酵母高效表达人骨形成蛋白技术,尤其涉及根据酵母偏爱密码子对人骨形成蛋白成熟肽序列进行定点突变技术。其特征是用含人BMP4和7cDNA序列的质粒pBluescript KS-BMP4和pBluescript KS-BMP7为模板,PCR扩增得到人BMP4和7成熟肽cDNA序列。利用简化的重叠PCR技术分别对人BMP4和7成熟肽cDNA序列中精氨酸密码子进行定点突变。突变后的序列作为模板克隆到甲醇酵母表达质粒pPIC9K中并转化到甲醇酵母GS115内。通过筛选并获得阳性克隆。构建好的工程菌在BMGY和BMMY培养基中培养,经甲醇诱导后,高效表达重组人骨形成蛋白。本发明方法可高效表达分泌型重组人BMPs。通过定点突变,表达量提高了至少5倍,达到0.2mg/ml以上。重组人BMPs可用于骨科及相关临床治疗。

    一种前体蛋白Kex2过表达毕赤酵母菌株及其构建方法

    公开(公告)号:CN110438022A

    公开(公告)日:2019-11-12

    申请号:CN201811177983.0

    申请日:2018-10-10

    Abstract: 本发明涉及一种前体蛋白Kex2过表达毕赤酵母菌株及其构建方法。其特征是设计PCR上游引物和下游引物,在进行Kex2基因克隆,用EcoR I限制酶分别对回收纯化后的Kex2基因和pGAPZB表达质粒进行酶切,酶切后用DNA胶纯化回收试剂盒分别纯化酶切后的Kex2基因和线性化的pGAPZB表达质粒,然后利用T4连接酶将Kex2基因连接到pGAPZB表达质粒上得到转化子,将转化子连接产物转化大肠杆菌TOP 10中得到Kex2过表达毕赤酵母菌株;本发明构建的前体蛋白的Kex2过表达毕赤酵母菌株,与未改造的传统毕赤酵母相比能更有效加工前体蛋白,加工效率可达到85%以上。

    优化的Komagataella pastoris酵母α-factor信号肽及应用

    公开(公告)号:CN110028562A

    公开(公告)日:2019-07-19

    申请号:CN201910338973.9

    申请日:2019-04-25

    Abstract: 本发明公开了优化的Komagataella pastoris酵母α-factor信号肽及应用。本发明对具有如SEQID NO:1所示氨基酸序列的Komagataella pastoris酵母α-factor信号肽引入一个N糖基化位点,得到优化后的Komagataella pastoris酵母α-factor信号肽,其氨基酸序列如SEQIDNO:3所示。本发明优化的α-factor信号肽特别适用于引导外源蛋白在毕赤酵母中的分泌表达,与优化前信号肽相比,表达水平提高了25-35倍,其应用有利于筛选到高表达菌株,具有降低生产成本、便于后续纯化等优势。

    外套膜游离细胞与组织工程支架珠核在体外共培养后植核培育珍珠的方法

    公开(公告)号:CN105309345A

    公开(公告)日:2016-02-10

    申请号:CN201510304765.9

    申请日:2015-06-07

    CPC classification number: Y02A40/81 Y02A40/822 A01K61/00

    Abstract: 本发明公开一种外套膜游离细胞与组织工程支架珠核在体外共培养后植核培育珍珠的方法,将珍珠贝的外套膜组织用酶消化法分离成单个存在的游离细胞,配制成一定细胞密度的细胞悬液;在植入育珠蚌的珠核表面粘附一层厚度基本均匀的高分子聚合物组织工程支架,与游离的珍珠贝外套膜细胞在体外一起培养,使外套膜细胞粘附在珍珠核表面的组织工程支架纤维中分裂生长,待细胞在组织工程支架中生长、增殖,围绕珠核表面形成一个细胞基本均匀分布的珍珠囊后,将珠核移植到育珠蚌体内,在珍珠养殖场中养殖培养珍珠。本发明解决了传统外套膜细胞小片植入法存在的细胞在珠核周围迁移后分布不均匀导致异形珍珠的问题,也使得珍珠核与育珠蚌的相容性很好。

    利用角朊细胞干细胞和牙髓干细胞进行牙齿再生的技术

    公开(公告)号:CN1587393A

    公开(公告)日:2005-03-02

    申请号:CN200410071721.8

    申请日:2004-07-15

    Abstract: 本发明属于器官再生技术,具体说,本发明涉及利用角朊细胞干细胞和牙髓干细胞进行牙齿再生的技术。本发明的技术方案:从臼牙中取出牙髓组织,经消化酶消化后,转入培养液中培养;培养24h后,用PBS洗涤三次,去除末贴壁细胞,贴壁生长的细胞继续培养至14-16天时,进行传代培养;牙髓干细胞经生长因子BMP4和FGF10诱导24h后将体外培养的角朊细胞干细胞和牙髓干细胞进行重组,形成重组团块;将重组团块置于37℃5%CO2培养箱中培养24h,再移植到口腔内,经培养10-12周后,在口腔内形成牙齿。本发明的优点在于利用角朊细胞干细胞和牙髓干细胞进行牙齿再生,角朊细胞干细胞和牙髓干细胞可根据公开的技术手段通过体外大量培养得到,大大扩大了材料的来源,方便推广使用。

    一种用于生产重组蛋白的毕赤酵母化学成分限定培养基

    公开(公告)号:CN119639644A

    公开(公告)日:2025-03-18

    申请号:CN202411974791.8

    申请日:2024-12-30

    Abstract: 本发明公开了一种用于生产重组蛋白的毕赤酵母化学成分限定培养基。所述的化学成分限定培养基包含酵母碳源、无机盐、维生素、氨基酸、脂质混合物、微量元素。本发明的培养基化学成分明确,配制简单,能支持毕赤酵母高密度发酵和高水平重组蛋白生产,可用于科学研究及工业生产。

    一种优化的毕赤酵母GS115交配外激素α-factor信号肽及其应用

    公开(公告)号:CN110054667B

    公开(公告)日:2023-06-16

    申请号:CN201910339544.3

    申请日:2019-04-25

    Abstract: 本发明公开了一种优化的毕赤酵母GS115交配外激素α‑factor信号肽及其应用。本发明对具有如SEQID NO:1所示氨基酸序列的毕赤酵母GS115 α‑factor信号肽引入一个N糖基化位点,得到优化后的毕赤酵母GS115交配外激素α‑factor信号肽,其氨基酸序列如SEQIDNO:3所示。本发明优化的α‑factor信号肽特别适用于引导外源蛋白在毕赤酵母中的分泌表达,与优化前信号肽相比,表达水平提高了5‑7倍,其应用有利于筛选到高表达菌株,具有降低生产成本、便于后续纯化等优势。

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