公开(公告)号：CN112430591B

公开(公告)日：2022-05-24

申请号：CN202011327134.6

申请日：2020-11-24

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 欧志敏 ,  卢媛 ,  程朋朋 ,  代洪倩 ,  王金美 ,  张楚玥 ,  唐岚

IPC: C12N11/087 ,  C12N11/18 ,  C12N9/04 ,  C12P7/62 ,  C12P41/00 ,  B82Y40/00 ,  B82Y30/00

Abstract: 本发明公开了一种纳米高分子‑双酶复合物及其制备与在(R)‑2‑羟基‑4‑苯基丁酸乙酯合成中的应用，以葡萄糖脱氢酶和来源于Saccharomyces cerevisiae CGMCC No.3361的羰基还原酶为双酶，以聚丙烯酸为载体，以1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺为交联剂，以磷酸盐缓冲液为反应介质，在20℃‑40℃、180‑220rpm摇床中混合搅拌10‑60min，获得纳米高分子‑双酶复合物。本发明高分子‑双酶复合物用于油水两相中羰基化合物的不对称还原反应，可以同时实现辅酶再生，该方法可以提高催化剂的稳定性，延长催化剂使用寿命，实现重复利用，提高生产效率。

公开(公告)号：CN114250216A

公开(公告)日：2022-03-29

申请号：CN202111586604.5

申请日：2021-12-23

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 欧志敏 ,  程朋朋 ,  卢媛 ,  王金美 ,  张楚玥

IPC: C12N9/56 ,  C07K1/18 ,  C07K1/34 ,  C07K1/14

Abstract: 本发明公开了一种纳豆激酶的分离纯化方法，将纳豆激酶粗品用缓冲液溶解后过滤，滤液作为上样液进行DEAE‑Sephadex A‑50阴离子交换柱层析；上样结束后，先以0.1M、pH7.4的磷酸缓冲液进行洗脱，洗脱速度10s/滴，采用色谱工作站监测流出液，出峰前按每10min/管收集，出峰处每个峰收集，洗脱至流出液不出峰；合并含有纳豆激酶蛋白和酶活的流出液，超滤，滤液冻干，即为纳豆激酶纯酶。本发明方法简化了纯化步骤，降低了纯化过程中酶的损失，大幅缩减纯化所需时间和成本，电泳纯纳豆激酶，比活达到了90080.6U/mg，纯化倍数为3.2，酶活回收率为82.62％。

公开(公告)号：CN112430591A

公开(公告)日：2021-03-02

申请号：CN202011327134.6

申请日：2020-11-24

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 欧志敏 ,  卢媛 ,  程朋朋 ,  代洪倩 ,  王金美 ,  张楚玥 ,  唐岚

IPC: C12N11/087 ,  C12N9/04 ,  C12P7/62 ,  C12P41/00 ,  B82Y40/00 ,  B82Y30/00

Abstract: 本发明公开了一种纳米高分子‑双酶复合物及其制备与在(R)‑2‑羟基‑4‑苯基丁酸乙酯合成中的应用，以葡萄糖脱氢酶和来源于Saccharomyces cerevisiae CGMCC No.3361的羰基还原酶为双酶，以聚丙烯酸为载体，以1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨基丙基)碳二亚胺为交联剂，以磷酸盐缓冲液为反应介质，在20℃‑40℃、180‑220rpm摇床中混合搅拌10‑60min，获得纳米高分子‑双酶复合物。本发明高分子‑双酶复合物用于油水两相中羰基化合物的不对称还原反应，可以同时实现辅酶再生，该方法可以提高催化剂的稳定性，延长催化剂使用寿命，实现重复利用，提高生产效率。