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公开(公告)号：CN102517224A
公开(公告)日：2012-06-27
申请号：CN201110446673.6
申请日：2011-12-28
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种表面展示纤维素酶的重组酿酒酵母及构建方法和应用。该重组酿酒酵母的构建方法为：将纤维素酶基因插入酿酒酵母表达载体pGMAK中GAL1启动子下游MFα1信号肽与酿酒酵母的细胞壁α凝集素基因之间，构建获得重组质粒；采用同源重组技术将酿酒酵母的GAL1基因替换为GAL4基因，将所述重组质粒转入该细胞，获得重组酿酒酵母。本发明通过同源重组技术获得了具有双重GAL4基因的重组酿酒酵母，可有效提高GAL1启动子表达效率；同时，细胞壁α凝集素能将纤维素酶高密度展示表达在酿酒酵母细胞壁外表面。利用该重组酿酒酵母表面展示纤维素酶，表达效率较高，表达量较大，能获得较高酶活的纤维素酶，且酵母发酵培养后可直接作为纤维素酶制剂使用。
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公开(公告)号：CN102242107A
公开(公告)日：2011-11-16
申请号：CN201010171804.X
申请日：2010-05-14
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明的一种提高亚油酸异构酶活力持续性的方法，包括以下步骤：将亚油酸异构酶基因(Genbank号：DQ227322)连接在酿酒酵母细胞壁成份α凝集素序列(Genbank号：M28164)的N端，然后插入酿酒酵母表达载体GAL1启动子(Genbank号：AY428072)下游MFα1信号肽序列(Genbank号：M17301)的C端，构建成表达框，表达框从N端到C端：GAL1启动子+MFα1信号肽序列+亚油酸异构酶基因+α凝集素序列；将包含该表达框的酵母质粒转化入酿酒酵母细胞。本发明的优点：将亚油酸异构酶展露表达在酿酒酵母细胞壁外表面，实现酶与细胞外底物的完全接触，从而显著提高亚油酸异构酶活力持续性。
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公开(公告)号：CN102242105A
公开(公告)日：2011-11-16
申请号：CN201010171773.8
申请日：2010-05-14
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明的一种提高谷氨酸脱羧酶活性的方法，包括以下步骤：将谷氨酸脱羧酶基因(Genbank号：NM_168056)连接在酿酒酵母细胞壁成份α凝集素序列(Genbank号：M28164)的N端，然后插入酿酒酵母表达载体GAL1启动子(Genbank号：AY428072)下游MFα1信号肽序列(Genbank号：M17301)的C端，构建成表达框，表达框从N端到C端：GAL1启动子+MFα1信号肽序列+谷氨酸脱羧酶基因+α凝集素序列；将包含该表达框的酵母质粒转化入酿酒酵母细胞。本发明的优点：将谷氨酸脱羧酶展露表达在酿酒酵母细胞壁外表面，实现酶与细胞外底物的完全接触，从而显著提高谷氨酸脱羧酶活性。
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公开(公告)号：CN102212592A
公开(公告)日：2011-10-12
申请号：CN201110108793.5
申请日：2011-04-28
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种酵母展示脂肪酶催化合成麦芽糖月桂酸酯的方法，包括：将麦芽糖和月桂酸溶于有机溶剂中，加入酵母展示脂肪酶，于50～60℃反应10～14小时，分离、纯化制得麦芽糖月桂酸酯；将经线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72～144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母展示脂肪酶；本发明通过将脂肪酶展示在细胞外，利用该酶制剂催化合成麦芽糖月桂酸酯，不仅提高了转化效率，而且缩短了反应时间，降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN102212590A
公开(公告)日：2011-10-12
申请号：CN201110108737.1
申请日：2011-04-28
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种酵母展示脂肪酶催化合成蔗糖棕榈酸酯的方法，包括：将蔗糖和棕榈酸溶于有机溶剂中，加入酵母展示脂肪酶，于50～60℃反应10～14小时，分离、纯化制得蔗糖棕榈酸酯；将经线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS 115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72～144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母展示脂肪酶；本发明通过将脂肪酶展示在细胞外，利用该酶制剂催化合成蔗糖棕榈酸酯，不仅提高了转化效率，而且缩短了反应时间，降低了生产成本。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102212577A
公开(公告)日：2011-10-12
申请号：CN201110108816.2
申请日：2011-04-28
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种酵母展示脂肪酶催化合成维生素E琥珀酸酯的方法，包括：将维生素E和琥珀酸酐溶于有机溶剂中，加入酵母展示脂肪酶，无氧条件下于50～60℃反应10～14小时，分离、纯化制得维生素E琥珀酸酯；将经线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichiapastoris)GS115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72～144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母展示脂肪酶；本发明通过将脂肪酶展示在细胞外，利用该酶制剂催化合成维生素E琥珀酸酯，不仅提高了转化效率，而且缩短了反应时间，降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN102212575A
公开(公告)日：2011-10-12
申请号：CN201110110431.X
申请日：2011-04-28
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种酵母展示脂肪酶催化合成L-抗坏血酸棕榈酸酯的方法，包括：将L-抗坏血酸和棕榈酸溶于有机溶剂中，加入酵母展示脂肪酶，无氧条件下于50～60℃反应4～8小时，分离、纯化制得L-抗坏血酸棕榈酸酯；将经线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72～144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母展示脂肪酶；本发明通过将脂肪酶展示在细胞外，利用该酶制剂催化合成L-抗坏血酸棕榈酸酯，不仅提高了转化效率，而且缩短了反应时间，降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN102212570A
公开(公告)日：2011-10-12
申请号：CN201110108725.9
申请日：2011-04-28
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种酵母展示脂肪酶催化合成维生素C共轭亚油酸酯的方法，包括：将L-抗坏血酸和共轭亚油酸溶于有机溶剂中，加入酵母展示脂肪酶，无氧条件下于50～60℃反应4～8小时，分离、纯化制得L-抗坏血酸共轭亚油酸酯；将经线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72～144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母展示脂肪酶；本发明通过将脂肪酶展示在细胞外，利用该酶制剂催化合成L-抗坏血酸共轭亚油酸酯，不仅提高了转化效率，而且缩短了反应时间，降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN102212583B
公开(公告)日：2013-08-14
申请号：CN201110108736.7
申请日：2011-04-28
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种酵母展示脂肪酶催化合成辛烯基琥珀酸淀粉酯的方法，包括：将谷物淀粉溶于水，吸涨后加入辛烯基琥珀酸酐和酵母展示脂肪酶，在34～36℃下搅拌反应1～1.5小时，分离、纯化制得辛烯基琥珀酸淀粉酯钠。所述的酵母展示脂肪酶制备方法为：将线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72～144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母展示脂肪酶。本发明通过将脂肪酶展示在细胞外，利用该酶制剂催化合成辛烯基琥珀酸淀粉酯，不仅提高了转化效率，而且缩短了反应时间，降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN102212580B
公开(公告)日：2013-08-14
申请号：CN201110110787.3
申请日：2011-04-28
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种酵母展示脂肪酶催化合成葡萄糖月桂酸酯的方法，包括：将葡萄糖和月桂酸溶于有机溶剂中，加入酵母展示脂肪酶，于50～60℃反应10～14小时，分离、纯化制得葡萄糖月桂酸酯；将经线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72～144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母展示脂肪酶；本发明通过将脂肪酶展示在细胞外，利用该酶制剂催化合成葡萄糖月桂酸酯，不仅提高了转化效率，而且缩短了反应时间，降低了生产成本。
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