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公开(公告)号：CN115074464A
公开(公告)日：2022-09-20
申请号：CN202210725368.9
申请日：2022-06-23
Applicant: 安徽农业大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6806 , C12Q1/6844 , C12R1/93
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，且公开了一种基于MIRA荧光法快速检测马立克氏病病毒的检测方法，包括以下步骤：S1、组织样品处理：称取约1g的各组织样品，加图1mL PBS后放入研磨钵中研磨成匀浆，转移至无菌离心管中，在离心机中以8500rpm/min离心3min；S2、病毒基因组DNA提取：使用某生化科技有限公司的病毒基因组DNA提取试剂盒(离心柱型)提取病毒基因组；本发明针对马立克氏病Meq基因的保守序列，设计了专门的引物和探针，并且使用多酶恒温快速扩增技术(MIRA)对马立克氏病，建立一种在常温下能快速扩增核酸的技术，提高了分子生物学的检测效率，降低了检测门槛，节省了检测时间。
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公开(公告)号：CN114959115A
公开(公告)日：2022-08-30
申请号：CN202210593501.X
申请日：2022-05-27
Applicant: 安徽农业大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/686 , C12Q1/6806 , C12R1/93
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，且公开了一种基于MIRA荧光法快速检测GAstV的检测方法，包括以下步骤：S1、组织样品的处理：将称取1g的各组织样品，加入1mL PBS放入研磨钵中研磨成匀浆，转移至无菌离心管中，在离心机中以8500rpm/min离心3min；S2、病毒核酸的提取：使用某生化科技有限公司的病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒(离心柱型)提取病毒RNA；本发明GAstV ORF2基因的保守区域设计了特异性的引物和探针，并使用MIRA技术对GAstV进行核酸扩增，建立了GAstV的快速检测方法。该方法提高了生物学的检测效率，降低了检测门槛，节省了检测时间，并且操作简单，对仪器设备要求不高且二十分钟内就能得到结果，即使偏远地区也能对疫病进行实时监测。
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公开(公告)号：CN112961941A
公开(公告)日：2021-06-15
申请号：CN202110281107.8
申请日：2021-03-16
Applicant: 安徽农业大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明涉及PCV3病毒检测技术领域，且公开了一种基于MIRA荧光法快速检测PCV3病毒的引物和探针，包括四对引物和一个探针，四对引物和一个探针的基因序列具体如下：第一对引物：PCV3‑MIRA‑F1：5'‑GTACCAGATCGGATCTTCAAGCAGCAGCT‑3'；PCV3‑MIRA‑R1：5'‑GCAATTCATCAAATGGAACCCACCCATAA‑3'；本发明解决了聚合酶链式反应最后需要核酸胶电泳呈现结果，耗时较长，实时荧光定量PCR需要昂贵的热循环仪，对精密仪器依赖度高，需要专业的技术人员操作和判读结果，在基层和现场的检测应用受到很大限制，等温核酸技术中的LAMP方法需要多对引物，对靶基因的要求高，容易出现假阳性的问题。
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公开(公告)号：CN109580941A
公开(公告)日：2019-04-05
申请号：CN201811376701.X
申请日：2018-11-19
Applicant: 安徽农业大学
IPC: G01N33/569
Abstract: 本发明公开了一种检测鸭坦布苏病毒抗体的间接ELISA方法，利用鸭坦布苏病毒全基因序列设计一对引物以扩增NS1基因，构建蛋白表达载体，通过IPTG(异丙基硫代半乳糖苷)诱导表达获得重组表达蛋白包涵体，以包涵体经纯化、复性、浓缩后作为包被抗原，建立检测鸭血血清中鸭坦布苏病毒抗体的间接ELISA方法。本发明的抗体为非结构蛋白中的NS1蛋白，检验结果中假阳性少，IFA符合率高，且检验结果重复性好，敏感性强，检测时间快，5小时内基本可以检测出结果。动物试验结果显示抗体在感染鸭坦布苏病毒后出现阳性时间早，持续时间长。
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