公开(公告)号：CN114959115A

公开(公告)日：2022-08-30

申请号：CN202210593501.X

申请日：2022-05-27

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 邵颖 ,  祁钊 ,  杨侃侃 ,  孙会会 ,  宋祥军 ,  涂健 ,  刘红梅 ,  王勇 ,  王振宇

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/686 ,  C12Q1/6806 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，且公开了一种基于MIRA荧光法快速检测GAstV的检测方法，包括以下步骤：S1、组织样品的处理：将称取1g的各组织样品，加入1mL PBS放入研磨钵中研磨成匀浆，转移至无菌离心管中，在离心机中以8500rpm/min离心3min；S2、病毒核酸的提取：使用某生化科技有限公司的病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒(离心柱型)提取病毒RNA；本发明GAstV ORF2基因的保守区域设计了特异性的引物和探针，并使用MIRA技术对GAstV进行核酸扩增，建立了GAstV的快速检测方法。该方法提高了生物学的检测效率，降低了检测门槛，节省了检测时间，并且操作简单，对仪器设备要求不高且二十分钟内就能得到结果，即使偏远地区也能对疫病进行实时监测。

公开(公告)号：CN114277099A

公开(公告)日：2022-04-05

申请号：CN202210000997.5

申请日：2022-01-04

Applicant: 安徽农业大学 ,  安徽省动物疫病预防与控制中心 ,  安徽省兽药饲料监察所

Inventor： 宋祥军 ,  涂健 ,  李雅男 ,  祁钊 ,  邵颖 ,  杨侃侃 ,  刘红梅 ,  姬凯元 ,  朱良强 ,  吴昊 ,  王立 ,  刘发全

IPC: C12Q1/6816 ,  C12Q1/70 ,  C12N15/11 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及病毒检测技术领域，且公开了一种PPV检测的crRNA引物对、CRISPRCas12a系统及应用方法，包括以下步骤：S1、组织样品的处理：将称取约1g的各组织样品，加入1mL PBS后放入研磨钵中研磨成匀浆，转移至无菌离心管中，在离心机中以12000rpm/min离心3min；S2、病毒核酸的提取：使用某生化科技有限公司的病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒对病毒进行核酸提取；S3、引物设计：在GenBank中检索猪细小病毒全基因组(GenBank ID:NC_001718.1)，通过Meglign软件分析比对，确定猪细小病毒全基因组中高度保守片段为VP2基因，使用Primer Premier 5软件，设计VP2基因的全长引物，根据猪细小病毒全基因组中高度保守片段VP2基因，使用CRISPR‑DT网站中Cpf1引物设计软件设计猪细小病毒VP2基因的crRNA引物，并委托某生物公司合成生产。

公开(公告)号：CN114774591A

公开(公告)日：2022-07-22

申请号：CN202210594468.2

申请日：2022-05-27

Applicant: 安徽农业大学 ,  安徽省动物疫病预防与控制中心

Inventor： 宋祥军 ,  祁钊 ,  王景芳 ,  杨侃侃 ,  涂健 ,  邵颖 ,  刘华 ,  朱良强 ,  陈曦 ,  王勇 ,  王振宇

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，且公开了一种基于CRISPR/Cas12a系统的鸡传染性贫血病毒的检测方法，包括以下步骤：S1、组织样品的处理：将称取约1g的各组织样品，加入1mL PBS后放入研磨钵中研磨成匀浆，转移至无菌离心管中，在离心机中以8500rpm/min离心3min；S2、病毒核酸提取：使用某生化科技有限公司的病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒(离心柱型)提取病毒RNA；本发明将CRISPR/Cas12a系统与ERA技术相结合，建立鸡传染性贫血病毒快速分子检测方法，该方法具有可视化、敏感性高、特异性强、不依赖贵重仪器设备等优点，整个检测过程只需1h左右，为鸡传染性贫血病毒快速诊断提供新的手段，对免疫抑制性病毒的监测具有重要意义。

公开(公告)号：CN113528613A

公开(公告)日：2021-10-22

申请号：CN202110805340.1

申请日：2021-07-16

Applicant: 安徽农业大学 ,  安徽大自然种猪股份有限公司 ,  芜湖英特菲尔生物制品产业研究院有限公司 ,  安徽昌农农牧食品有限公司

Inventor： 邵颖 ,  杨侃侃 ,  祁钊 ,  王成 ,  涂健 ,  宋祥军 ,  姚臣 ,  杨正庆 ,  祖坤 ,  赵俊 ,  许成虎 ,  周师义

IPC: C12Q1/6806 ,  C12Q1/689 ,  C12Q1/6844 ,  C12Q1/10 ,  C12R1/42

Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，且公开了一种基于多酶恒温核酸快速扩增技术检测细菌基因的实验方法，包括如下实验步骤：S1、细菌基因组DNA提取；S2、引物与探针设计；S3、目的片段PCR扩增；S4、PCR产物回收及纯化；S5、标准质粒的构建；S6、重组质粒鉴定；S7、MIRA体系的建立；S8、MIRA引物筛选；S9、灵敏度试验；S10、特异性试验；S11、重复性试验；S12、临床样本检测；本实验应用多酶恒温快速扩增技术分别针对沙门氏菌中invA基因，筛选合适的引物和探针，本实验建立的MIRA诊断技术方便快捷，便于规模化畜禽养殖场的快速大规模检测诊断，此种方法具有较高的特异性、高度的灵敏性、实验所需仪器简单便捷并且反应所需时间短，适合临床的紧急样本的快速检测诊断。