公开(公告)号：CN114277099A

公开(公告)日：2022-04-05

申请号：CN202210000997.5

申请日：2022-01-04

Applicant: 安徽农业大学 ,  安徽省动物疫病预防与控制中心 ,  安徽省兽药饲料监察所

Inventor： 宋祥军 ,  涂健 ,  李雅男 ,  祁钊 ,  邵颖 ,  杨侃侃 ,  刘红梅 ,  姬凯元 ,  朱良强 ,  吴昊 ,  王立 ,  刘发全

IPC: C12Q1/6816 ,  C12Q1/70 ,  C12N15/11 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及病毒检测技术领域，且公开了一种PPV检测的crRNA引物对、CRISPRCas12a系统及应用方法，包括以下步骤：S1、组织样品的处理：将称取约1g的各组织样品，加入1mL PBS后放入研磨钵中研磨成匀浆，转移至无菌离心管中，在离心机中以12000rpm/min离心3min；S2、病毒核酸的提取：使用某生化科技有限公司的病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒对病毒进行核酸提取；S3、引物设计：在GenBank中检索猪细小病毒全基因组(GenBank ID:NC_001718.1)，通过Meglign软件分析比对，确定猪细小病毒全基因组中高度保守片段为VP2基因，使用Primer Premier 5软件，设计VP2基因的全长引物，根据猪细小病毒全基因组中高度保守片段VP2基因，使用CRISPR‑DT网站中Cpf1引物设计软件设计猪细小病毒VP2基因的crRNA引物，并委托某生物公司合成生产。

公开(公告)号：CN112961941A

公开(公告)日：2021-06-15

申请号：CN202110281107.8

申请日：2021-03-16

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 涂健 ,  赵艳利 ,  祁克宗 ,  宋祥军 ,  刘红梅 ,  邵颖 ,  杨侃侃 ,  牛香鹏 ,  李雅男

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及PCV3病毒检测技术领域，且公开了一种基于MIRA荧光法快速检测PCV3病毒的引物和探针，包括四对引物和一个探针，四对引物和一个探针的基因序列具体如下：第一对引物：PCV3‑MIRA‑F1：5'‑GTACCAGATCGGATCTTCAAGCAGCAGCT‑3'；PCV3‑MIRA‑R1：5'‑GCAATTCATCAAATGGAACCCACCCATAA‑3'；本发明解决了聚合酶链式反应最后需要核酸胶电泳呈现结果，耗时较长，实时荧光定量PCR需要昂贵的热循环仪，对精密仪器依赖度高，需要专业的技术人员操作和判读结果，在基层和现场的检测应用受到很大限制，等温核酸技术中的LAMP方法需要多对引物，对靶基因的要求高，容易出现假阳性的问题。