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公开(公告)号：CN107142272A
公开(公告)日：2017-09-08
申请号：CN201710413737.X
申请日：2017-06-05
Applicant: 南京金斯瑞生物科技有限公司
CPC classification number: C12N15/70 , C12N9/22 , C12N2810/10
Abstract: 本发明公开了一种控制大肠杆菌中质粒复制的方法。本发明设计开发的质粒调控方法基于Crispr/Cas9系统；其利用表达的dCas9蛋白以及转录的针对于质粒复制区靶序列的gRNA，有效的实现了质粒复制的调控抑制，该方法尚未见其它文献和专利报道，是一种全新的方法。该方法中使用的针对复制区的靶序列，可以有多种选择，保证了利用不同的dCas9/gRNA对，实现不同程度的质粒复制调控的目的。该方法能够有效的降低质粒复制后产量2‑34倍，相比以前专利报道的方法，具有调控范围更广，调控能力更强的特点。总之，该方法设计新颖，能够有效实现对质粒复制不同程度的调控。
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公开(公告)号：CN106282157A
公开(公告)日：2017-01-04
申请号：CN201510268154.3
申请日：2015-05-22
Applicant: 南京金斯瑞生物科技有限公司
IPC: C12N15/10
Abstract: 本发明公开了一种由短链核苷酸介导的DNA组装方法及其应用。本发明组装方法包括：“长序列”的合成，模块载体的准备及组装，骨架载体的改造及组装，短序列的准备，模块载体、改造过的骨架载体、“短序列”的酶切连接一体化反应等步骤。在本发明中，“短序列”为启动子和RBS等调节元件，“长序列”为基因或者载体的复制起始原点等。“短序列”被设计为可以合成的双链DNA链，在组装过程中既可以连接“长序列”又可以作为条码序列决定组装顺序。操纵子中基因的顺序可以通过合成带有不同粘性末端的“短序列”来实现。本发明方法允许多个因子同时参与通路中基因的调控，可以用来构建生物合成通路的组合文库，达到通量优化通路的目的。
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公开(公告)号：CN110070913B
公开(公告)日：2023-06-27
申请号：CN201710611752.5
申请日：2017-07-25
Applicant: 南京金斯瑞生物科技有限公司
Abstract: 一种基于免疫算法的密码子优化方法,其特征在于先后使用免疫算法和遗传算法分别对蛋白质编码序列进行局部多目标优化和全局多目标优化，再用穷举法对序列进行微调优化，从而最大限度的搜索到最优表达序列。本发明既保留了遗传算法随机全局并行搜索的特点，又在相当大程度上避免未成熟收敛，确保快速收敛于全局最优解。本发明第一次结合利用免疫算法与遗传算法的准确度和效率的优势，通过分步流程（依次分别是局部优化、全局优化、微调优化）进行密码子优化，并通过实例测试证明该算法进行密码子优化的高效性。
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公开(公告)号：CN107974448B
公开(公告)日：2023-04-14
申请号：CN201610920370.6
申请日：2016-10-21
Applicant: 南京金斯瑞生物科技有限公司
IPC: C12N15/10
Abstract: 本发明公开了一种序列复杂基因的合成方法。本发明方法包括：1)利用本发明提供的基因分段和单链寡核苷酸设计规则，设计一系列包含基因正，负链序列的30bp‑150bp的单链寡核苷酸序列，2)挑选1中获得的单链寡核苷酸片段，根据正，负链互补配对的原则，利用本发明设计的退火程序，每对正，负链单链寡核苷酸片段单独退火成双链寡核苷酸片段，并装载到目标载体上，测序，验证；3)利用“识别序列外切割”的核酸内切酶，基于2中获得的双链寡核苷酸片段，经过1‑3轮的体外连接组装，克隆，验证，完成100bp‑20kb序列复杂基因的合成组装。本发明提供的方法，能够有效的合成传统方法无法合成或者合成起来困难的序列复杂基因。
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公开(公告)号：CN108250303B
公开(公告)日：2023-01-03
申请号：CN201711378313.0
申请日：2017-12-19
Applicant: 南京金斯瑞生物科技有限公司
IPC: C07K19/00 , C12N15/62 , A61K39/395 , A61P35/00
Abstract: 本发明提供了一种单域抗体融合蛋白，包括与细胞因子融合的一个或多个单域抗体，尤其是与IL‑12或IL‑2融合的一个或多个抗PD‑1单域抗体。本发明还提供了该单域抗体融合蛋白在制备治疗肿瘤的药物中的应用。本发明的融合蛋白将单域抗体的分子小、渗透性好、稳定性高等优点与细胞因子的免疫调节等活性结合，具有更佳的抗肿瘤效果。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108531471B
公开(公告)日：2020-08-07
申请号：CN201710116019.6
申请日：2017-03-01
Applicant: 南京金斯瑞生物科技有限公司
IPC: C12N15/10
Abstract: 本发明公开了一种长基因合成方法。一种长基因合成方法，包含以下步骤：1)按照基因片段内部的typeIIs酶切位点对长基因进行两级分段；2)通过传统的基因合成获得二级片段；3)由二级片段利用Golden Gate拼接成一级片段；4)由一级片段利用酶切‑LCR的方法，或者PCR‑LCR的方法拼接成全长基因。此方法使用typeIIs酶切位点对大片段基因进行分段，typeIIs酶切位点有很多可供选择，因此方法适用于绝大部分的序列特征。本方法能够快速的将短片段拼接成长片段。由二级片段拼接成全长可以在五天内实现。整个技术方案流程化，可以利用软件进行自动化设计，同时可以使用自动化平台进行生产。
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公开(公告)号：CN108250303A
公开(公告)日：2018-07-06
申请号：CN201711378313.0
申请日：2017-12-19
Applicant: 南京金斯瑞生物科技有限公司
IPC: C07K19/00 , C12N15/62 , A61K39/395 , A61P35/00
CPC classification number: C07K16/2818 , A61K2039/505 , C07K14/535 , C07K14/5434 , C07K14/55 , C07K2317/569 , C07K2317/76 , C07K2317/92 , C07K2319/02
Abstract: 本发明提供了一种单域抗体融合蛋白，包括与细胞因子融合的一个或多个单域抗体，尤其是与IL‑12或IL‑2融合的一个或多个抗PD‑1单域抗体。本发明还提供了该单域抗体融合蛋白在制备治疗肿瘤的药物中的应用。本发明的融合蛋白将单域抗体的分子小、渗透性好、稳定性高等优点与细胞因子的免疫调节等活性结合，具有更佳的抗肿瘤效果。
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公开(公告)号：CN114008082A
公开(公告)日：2022-02-01
申请号：CN202080045773.5
申请日：2020-06-24
Applicant: 南京金斯瑞生物科技有限公司
Abstract: 提供了一种单克隆抗体‑细胞因子融合蛋白二聚体及其应用，所述单克隆抗体包括两条重链，所述融合蛋白二聚体包括第一重链多肽链和第二重链多肽链，其中所述单克隆抗体的一条重链与一种细胞因子连接形成第一重链多肽链，所述单克隆抗体另一条重链可选择地与另一种细胞因子连接形成第二重链多肽链。提供的单克隆抗体‑细胞因子融合蛋白二聚体，不仅充分保留了抗体的生物活性，而且明显改善了细胞因子的生物学活性。更重要的是，利用抗体分子的靶向特异性，增强免疫细胞的免疫应答，减弱了细胞因子的毒性，从而在提升药效的前提下保证了用药安全性。
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公开(公告)号：CN106282157B
公开(公告)日：2019-11-12
申请号：CN201510268154.3
申请日：2015-05-22
Applicant: 南京金斯瑞生物科技有限公司
IPC: C12N15/10
Abstract: 本发明公开了一种由短链核苷酸介导的DNA组装方法及其应用。本发明组装方法包括：“长序列”的合成，模块载体的准备及组装，骨架载体的改造及组装，短序列的准备，模块载体、改造过的骨架载体、“短序列”的酶切连接一体化反应等步骤。在本发明中，“短序列”为启动子和RBS等调节元件，“长序列”为基因或者载体的复制起始原点等。“短序列”被设计为可以合成的双链DNA链，在组装过程中既可以连接“长序列”又可以作为条码序列决定组装顺序。操纵子中基因的顺序可以通过合成带有不同粘性末端的“短序列”来实现。本发明方法允许多个因子同时参与通路中基因的调控，可以用来构建生物合成通路的组合文库，达到通量优化通路的目的。
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公开(公告)号：CN110070913A
公开(公告)日：2019-07-30
申请号：CN201710611752.5
申请日：2017-07-25
Applicant: 南京金斯瑞生物科技有限公司
Abstract: 一种基于免疫算法的密码子优化方法,其特征在于先后使用免疫算法和遗传算法分别对蛋白质编码序列进行局部多目标优化和全局多目标优化，再用穷举法对序列进行微调优化，从而最大限度的搜索到最优表达序列。本发明既保留了遗传算法随机全局并行搜索的特点，又在相当大程度上避免未成熟收敛，确保快速收敛于全局最优解。本发明第一次结合利用免疫算法与遗传算法的准确度和效率的优势，通过分步流程（依次分别是局部优化、全局优化、微调优化）进行密码子优化，并通过实例测试证明该算法进行密码子优化的高效性。
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