公开(公告)号：CN117384946A

公开(公告)日：2024-01-12

申请号：CN202211408927.X

申请日：2022-11-10

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 柳李旺 ,  应佳丽 ,  王燕 ,  徐良 ,  姚数琦 ,  谢洋 ,  沈峰 ,  王爽

IPC: C12N15/84 ,  A01H5/00 ,  A01H6/20

Abstract: 本发明公开了一种根癌农杆菌介导的萝卜遗传转化方法及其应用，选取4～5d苗龄的萝卜‘NAU‑LHZ’带柄子叶为外植体，预培养3d后，用1/2MS液体培养基重悬农杆菌作为侵染液，将外植体于28℃ 200rpm摇床中振荡培养20min，放滤纸上晾干，在黑暗下共培养3d后转到脱羧培养基上分化培养，直至生根培养获得萝卜再生植株。提取萝卜叶片DNA，使用通用引物鉴定是否导入目的基因。同时采用RT‑qPCR验证目的基因是否过表达。此外，将电泳鉴定的萝卜转基因阳性苗自交，获得T2代株系后提取DNA，采用通用引物扩增鉴定萝卜转基因阳性苗，T2代株系转化效率达46.15％。与前人已报道的浸花法相比，本发明提高了转化和筛选效率，为萝卜高效转化和基因功能验证提供了新方法，也为萝卜等再生顽拗型作物的转基因研究提供了技术支撑。

公开(公告)号：CN111944917A

公开(公告)日：2020-11-17

申请号：CN201910416357.0

申请日：2019-05-16

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 庄静 ,  王爽

IPC: C12Q1/6895 ,  C12N15/11 ,  C12Q1/6806

Abstract: 本发明提供一种基于转录组测序开发山茶属植物引物的方法：以茶树叶片为材料进行cDNA库的构建和illumina测序，经过滤和从头组装后获得转录组数据。使用MISA、SSR Hunter完成位点搜索，并对包含SSR位点的序列进行生物信息学分析。以此为据进行SSR分子标记引物的开发，利用开发的引物对部分山茶属植物材料进行遗传多样性分析。本发明成功设计38对引物，经多态性筛选最终获得16对多态性引物，利用这16对引物检测了部分山茶属植物资源的遗传相似性，验证了这些引物的可用性。本发明为山茶属植物SSR引物开发提供了新思路。

公开(公告)号：CN104862291B

公开(公告)日：2018-02-06

申请号：CN201510230022.1

申请日：2015-05-07

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 麻浩 ,  王占奎 ,  王爽 ,  克玉木·米吉提 ,  王泽 ,  顾爱星 ,  张桦

IPC: C12N9/26 ,  A01N65/20 ,  A01P7/04 ,  A01P21/00

Abstract: 本发明公开了cupin蛋白结构域在制备α‑淀粉酶抑制剂中的应用。本发明中发现了植物贮藏蛋白cupin结构具有α‑淀粉酶抑制剂功能，它是通过鹰嘴豆种子中α‑淀粉酶抑制剂的纯化及鉴定、蛋白原核表达并测定其抑制活性、cupin结构域缺失及氨基酸突变、来源于其他作物具有cupin结构域蛋白的原核表达并测定α‑淀粉酶抑制剂活性、测定cupin结构域蛋白生物学特性等手段实现的，并发现cupin结构域影响蛋白的α‑淀粉酶抑制活性具有普遍性。本发明可操作性强、重复性好、效率高、适用性强，对进一步发掘植物中贮藏蛋白类型α‑淀粉酶抑制剂具有广泛而深远的意义。