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公开(公告)号：CN109371047A
公开(公告)日：2019-02-22
申请号：CN201811162774.9
申请日：2018-09-30
Applicant: 华侨大学
Abstract: 本发明公开一种利用蛋白IHF-α构建和表达耐热性抗菌肽融合蛋白的方法，通过IHF-α蛋白与耐热性抗菌肽进行融合基因设计，设计成为含有IHF-α蛋白与耐热性抗菌肽基因序列的质粒，在大肠杆菌中进行转化和克隆表达得到蛋白后，并对蛋白纯化，最终得到含有耐热性抗菌肽的融合蛋白。本发明方法将难表达的耐热性抗菌肽利用耐热性的IHF-α融合表达，使抗菌肽潜在的抑菌性能够得到抑制，使得抗菌肽可以可溶性表达。该方法操作简单，将难表达、小分子量的抗菌肽，通过与耐热性的IHF-α联合表达，使得耐热性抗菌肽快速简便获得。
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公开(公告)号：CN107686860A
公开(公告)日：2018-02-13
申请号：CN201710811315.8
申请日：2017-09-11
Applicant: 华侨大学
IPC: C12Q1/6806
CPC classification number: C12Q1/6806 , C12Q2531/125 , C12Q2527/101 , C12Q2521/101
Abstract: 本发明公开了一种提高多引物RCA特异性的方法，其通过改良商品化多引物RCA试剂盒TempliPhi(Amersham Biosciences)中的各成分含量，替换成市面上容易购买并且价格低廉的2.5mMdNTP，10×BSA，phi29DNA聚合酶buffer。同时在多引物RCA反应过程中加入适当浓度的聚乙二醇(PEG，8000)，可以显著地提高多引物RCA的特异性，填补多引物RCA反应中一直以来难以消减的非特异性扩增产生的拖尾现象。实现了对市售多引物RCA试剂盒的显著优化。
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公开(公告)号：CN106367414A
公开(公告)日：2017-02-01
申请号：CN201610827757.7
申请日：2016-09-18
Applicant: 华侨大学
IPC: C12N15/10
CPC classification number: C12N15/1031 , C12Q2527/125
Abstract: 本发明公开一种利用聚乙烯亚胺增强重叠延伸PCR基因合成灵敏度和特异性的方法，步骤包括：设计需要合成的HU-β引物序列，得到混合重叠寡核苷酸模板；其中，每个序列都有25bp的重叠寡核苷酸，以覆盖整个DNA序列(200到1500碱基)；将含有DNA聚合酶，首尾引物，以及作为模板的上述步骤混合重叠寡核苷酸的反应液中加入体积10-5～10-13倍的PEI；按照常规PCR的解链，退火，延伸三个步骤进行反复地循环，将目的核酸片段合成并且扩增，本发明方法能够特异性地、高效地合成和扩增目标核酸序列。
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公开(公告)号：CN104593491B
公开(公告)日：2017-01-04
申请号：CN201410848236.0
申请日：2014-12-31
Applicant: 华侨大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明提供一种利用整合宿主因子来提高PCR扩增灵敏度的方法，所述方法如下：将含有脱氧核苷三磷酸、DNA聚合酶、寡核苷酸引物、以及作为模板的核酸片段的反应溶液中，加入整合宿主因子IHF，按照常规PCR的解链、退火、延伸三个步骤，进行反复的热循环，从而将目标核酸片段扩增，所述引物与整合宿主因子IHF的摩尔比例为0.005-1。本发明方法能够特异性地、高效地扩增目标核酸序列。
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公开(公告)号：CN105505972A
公开(公告)日：2016-04-20
申请号：CN201610040618.X
申请日：2016-01-21
Applicant: 华侨大学
CPC classification number: C12N15/70 , C12N15/66 , C12N2800/101
Abstract: 本发明提供一种利用聚乙烯亚胺提高T4DNA连接酶连接效率的方法，包括以下步骤：对目的DNA片段设计带有酶切位点的引物；通过PCR反应获得两端带有酶切位点的目的DNA片段；经酶切得到待连接的线性化载体和目的DNA片段；配置聚乙烯亚胺溶液备用；在连接体系中添加预设体积的聚乙烯亚胺溶液进行连接反应；在大肠杆菌中进行转化和克隆，得到重组DNA分子的克隆。本发明可以显著地提高T4DNA连接酶的连接效率，填补了将电正性高分子聚合物(聚乙烯亚胺)应用于提高T4DNA连接酶连接效率这一领域的空白。
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Patent Agency Ranking
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公开(公告)号：CN104845964A
公开(公告)日：2015-08-19
申请号：CN201510198272.1
申请日：2015-04-24
Applicant: 华侨大学
IPC: C12N15/10
Abstract: 本发明提供一种利用HU蛋白有效提高RCA扩增效率的方法，包括：HU蛋白的制备与纯化；使用TempliPhi DNA测序模板扩增试剂盒，按照试剂盒的说明进行变性操作和培育操作，通过在滚环扩增过程中添加一定浓度的非特异性DNA结合蛋白HU蛋白，然后分别将RCA扩增产物于1％琼脂糖凝胶中进行电泳。本发明可以显著地提高滚环扩增的效率，增强滚环扩增的灵敏度，实现了对市售RCA试剂盒的进一步优化。
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公开(公告)号：CN114230672A
公开(公告)日：2022-03-25
申请号：CN202111395810.8
申请日：2021-11-23
Applicant: 华侨大学
Abstract: 本发明属于食品技术领域，具体涉及一种牛乳铁蛋白肽融合蛋白、编码基因及其在海鲜保鲜和/或防腐中的应用。本发明提供一种从N端至C端包括依次连接的α‑Factor信号肽、单链DNA结合蛋白、牛乳铁蛋白肽和组蛋白标签的牛乳铁蛋白肽融合蛋白。利用本发明所述的融合蛋白具有稳定性高的优势，能够在长时间维持海产品的新鲜度。
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公开(公告)号：CN109371047B
公开(公告)日：2021-11-09
申请号：CN201811162774.9
申请日：2018-09-30
Applicant: 华侨大学
Abstract: 本发明公开一种利用蛋白IHF‑α构建和表达耐热性抗菌肽融合蛋白的方法，通过IHF‑α蛋白与耐热性抗菌肽进行融合基因设计，设计成为含有IHF‑α蛋白与耐热性抗菌肽基因序列的质粒，在大肠杆菌中进行转化和克隆表达得到蛋白后，并对蛋白纯化，最终得到含有耐热性抗菌肽的融合蛋白。本发明方法将难表达的耐热性抗菌肽利用耐热性的IHF‑α融合表达，使抗菌肽潜在的抑菌性能够得到抑制，使得抗菌肽可以可溶性表达。该方法操作简单，将难表达、小分子量的抗菌肽，通过与耐热性的IHF‑α联合表达，使得耐热性抗菌肽快速简便获得。
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公开(公告)号：CN105200074B
公开(公告)日：2019-02-22
申请号：CN201510602398.0
申请日：2015-09-21
Applicant: 华侨大学
Abstract: 本发明公开了一种利用DNA非特异性结合蛋白HU蛋白构建克隆载体的方法，通过对待连接的DNA片段设计引物，并引入DNA同源同组序列，在分别进行扩增，扩增产物和HU混合，利用传统的转化方法在大肠杆菌中进行转化和克隆，得到重组DNA质粒。本发明方法不依赖于任何重组酶，不受载体和目的片段的酶切位点限制，用同源重组的方法和HU蛋白一起完成目的片段与载体相连接的基因克隆技术。该技术操作简单，PCR产物一步定向克隆，目的片段与载体同源重组连接，常温反应时间短至15分钟，阳性率高达90％以上。
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