公开(公告)号：CN107022568A

公开(公告)日：2017-08-08

申请号：CN201610068626.5

申请日：2016-02-01

Applicant: 北京大学

Inventor： 周德敏 ,  夏青 ,  徐欢 ,  张子威 ,  吴一鸣 ,  王天畅 ,  王妍 ,  张礼和

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/11 ,  C12N15/113 ,  C12N5/10 ,  C07K14/18 ,  C12N15/51

Abstract: 本发明提供了在哺乳动物细胞中高效多点插入非天然氨基酸的系统，所述系统包括表达含有非天然氨基酸的蛋白质的表达载体，所述非天然氨基酸由密码子UAG编码以及含有古甲烷球菌的tRNA(tRNAPyl)和吡咯赖氨酰-tRNA合成酶(PylRS)基因的载体，所述系统中还包括包含经突变的eRF1的细胞系。此外，还提供了利用该系统制备定点突变的蛋白的方法。

公开(公告)号：CN107012121A

公开(公告)日：2017-08-04

申请号：CN201610055542.8

申请日：2016-01-27

Applicant: 北京大学

Inventor： 周德敏 ,  夏青 ,  徐欢 ,  张博 ,  司龙龙 ,  杨琦 ,  姚天卓 ,  张礼和

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/63 ,  C12N9/02 ,  C12N15/53

Abstract: 本发明涉及携带正交tRNA/氨酰tRNA合成酶稳定细胞系的构建方法。基于基因密码子扩展技术，利用一对正交的tRNA/氨酰tRNA合成酶将非天然氨基酸定点引入蛋白质，本发明还涉及双慢病毒载体的构建方法，携带多拷贝数正交tRNA载体的构建方法以及借助双慢病毒稳定转导、质粒稳定转染将正交的tRNA/氨酰tRNA合成酶基因稳定整合到细胞基因组的方法。本发明进一步涉及稳定细胞系的应用，如表达含有非天然氨基酸目的蛋白的用途。