基于谷氨酸脱氢酶的工程菌及其实现方法

    公开(公告)号:CN104498419A

    公开(公告)日:2015-04-08

    申请号:CN201410705878.5

    申请日:2014-11-27

    CPC classification number: C12N9/0016 C12P13/14 C12Y104/01002

    Abstract: 一种灰略红链霉菌(Streptomyces griseorubens)胞内谷氨酸脱氢酶编码基因及其应用。通过将该谷氨酸脱氢酶编码基因构建到表达载体上,并将该重组表达载体导入大肠杆菌进而得到可发酵合成谷氨酸脱氢酶的转基因重组大肠杆菌。本发明克服现有技术中由于谷氨酸脱氢酶多为胞内表达且表达量较低导致的应用范围和效果严重受限等不足,应用基因工程手段实现其体外的大量表达合成。此外,本发明通过在重组蛋白添加聚组氨酸标签的方法,方便了后期蛋白的纯化。本发明可为谷氨酸脱氢酶的规模化发酵生产提供一种新方法。

    基于谷氨酸合酶的工程菌及其实现方法

    公开(公告)号:CN104120103A

    公开(公告)日:2014-10-29

    申请号:CN201410373726.X

    申请日:2014-07-31

    Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域的谷氨酸合酶的工程菌及其实现方法,以灰略红链霉菌基因组DNA为模板,与含有酶切位点的引物进行PCR扩增依次得到编码谷氨酸合酶小亚基及大亚基的核苷酸序列;然后将扩增得到的基因序列依次连接到共表达载体pETDuet‐1,最终获得重组共表达载体pETDuet‐GG‐GF;之后将该谷氨酸合酶表达载体转化到大肠杆菌表达菌株。本发明针对现有技术存在的由于谷氨酸合酶在生物体内多为胞内酶且表达量较低导致的应用范围和效果严重受限等不足,应用基因工程手段实现其体外的大量表达合成,此外本发明通过在重组蛋白添加聚组氨酸标签的方法,方便了后期蛋白的纯化。

    秸秆降解生防链霉菌及其应用

    公开(公告)号:CN103555623A

    公开(公告)日:2014-02-05

    申请号:CN201310512364.3

    申请日:2013-10-25

    Abstract: 一种土壤修复技术领域的秸秆降解生防链霉菌及其应用,包括:菌种保藏和菌种活化,其中:菌种保藏采用-20℃低温冷冻保藏法,是微生物孢子处于较低的温度下,以降低其代谢速度从而达到保藏菌种的目的;菌种活化将冷冻保藏状态的菌种接种到YEME液体培养基中,待菌种逐渐适应培养环境进行繁殖,以获得数量足够、活力旺盛的培养物。另外,本发明涉及将链霉菌JSD-1用于生物防治。本发明利用已知的JSD-1菌株所未公开的硝态氮降解转化能力、以及对高温(如70℃)和高浓度硝酸盐(3%)有很强的耐受性,对植物病原(如番茄灰霉病和水稻恶苗病)微生物具有很好的抑制作用等特性,实现秸秆中的“难利用的碳”与设施次生盐渍化土壤中“过量的氮”的原位降解,并在高温堆肥外接菌剂和生物肥料的研制上有很好的应用潜力。

    具有秸秆降解能力的真菌及其在堆肥中的应用

    公开(公告)号:CN103468592A

    公开(公告)日:2013-12-25

    申请号:CN201310443222.6

    申请日:2013-09-25

    CPC classification number: Y02W30/43

    Abstract: 一种生物环保技术领域的具有秸秆降解能力的真菌及其在堆肥中的应用,该秸秆降解真菌JSD-17为草酸青霉(Penicillium oxalicum),保藏编号为CGMCC No.7743;进一步地,将所述秸秆降解真菌用于处理农业废弃物秸秆堆肥发酵。本发明所述草酸青霉不仅具有较强的纤维素酶合成能力,同时还具有秸秆中半纤维素和果胶组分的分解能力;本发明可以合成漆酶(Lac)、木质素过氧化物酶(Lip)和锰过氧化物酶(Mnp),大大加快了对秸秆中木质素组分的降解速度。

    基于田园秸秆废弃物的可移动微生物发酵系统

    公开(公告)号:CN103102193A

    公开(公告)日:2013-05-15

    申请号:CN201310080948.8

    申请日:2013-03-14

    CPC classification number: Y02A40/216 Y02W30/43

    Abstract: 一种农业微生物发酵技术领域的基于田园秸秆废弃物的可移动微生物发酵系统,该装置包括:发酵间、控制间、移动平台和斜面踏板,其中:发酵间和与之相连的控制间固定设置于移动平台的上方;斜面踏板、发酵间和控制间依次排列设置。本发明可人工移动,也可实时实地拆卸,能进行田园分布式秸秆废弃物发酵,节约了人力和原材料输送的成本。本发明结构独特新颖,在更加充分合理地利用田园秸秆废弃物,美化环境,资源循环利用方面具有很强的实用性。

    灰略红链霉菌果胶裂解酶编码基因及其外源表达和应用

    公开(公告)号:CN106636046A

    公开(公告)日:2017-05-10

    申请号:CN201610729000.4

    申请日:2016-08-25

    Abstract: 本发明公开一种克隆自灰略红链霉菌(Streptomyces griseorubens)的新型果胶裂解酶编码基因、体外表达方法及其酶学特征。本发明通过将果胶裂解酶基因序列连接到表达载体上,进而得到诱导合成果胶裂解酶的转基因重组大肠杆菌。本发明克服现有技术中由于果胶裂解酶在生物体内酶表达量和活性较低导致的应用范围和效果严重受限等不足,实现其体外的高效表达。此外,本发明通过添加可溶性聚组氨酸标签,不仅提高了该重组果胶裂解酶的活性和表达量,而且便于表达产物的后续纯化;测定结果表明,该果胶裂解酶是一种碱性、耐高温裂解酶,对多种重金属离子及酶活性抑制剂具有较强的耐受能力。本发明为新型果胶裂解酶制剂的开发与制备奠定了重要的基础。

    用于土壤次生盐渍化监测的绿色荧光蛋白的表达及应用方法

    公开(公告)号:CN105238808A

    公开(公告)日:2016-01-13

    申请号:CN201510629664.9

    申请日:2015-09-29

    Abstract: 一种用于土壤次生盐渍化监测的绿色荧光蛋白的表达及应用方法,根据设计出的PCR引物扩增出含有酶切位点的绿色荧光蛋白gfp基因序列,将其与pMD18‐T质粒连接,重组质粒与穿梭质粒pHIS1525分别酶切后连接,连接产物转入大肠杆菌DH5α中,通过菌落PCR技术挑选含有目的基因片段的阳性克隆。提取重组质粒pHIS1525‐GFP,将其转入已制备好的巨大芽孢杆菌NCT‐2原生质体中,转化子能够表达绿色荧光蛋白。将转化菌株接种到次生盐渍化土壤中,通过监测荧光菌株来分析巨大芽孢杆菌NCT‐2在次生盐渍化土壤中的存活情况。本发明具有快速简便且可实时监测的特点,有利于科学有效地指导该菌株菌肥的施用。

    硝酸盐同化细菌及其在修复设施次生盐渍化土壤中的应用

    公开(公告)号:CN103525739A

    公开(公告)日:2014-01-22

    申请号:CN201310512371.3

    申请日:2013-10-25

    Abstract: 一种土壤修复技术领域的硝酸盐同化细菌及其在修复设施次生盐渍化土壤中的应用,通过硝酸盐同化细菌NCT-2以土壤中硝态氮作为氮源,并将其同化为其它形态的无机氮或细胞组分,从而实现对硝态氮的降解转化、降低土壤中硝态氮含量并对土壤进行修复。该硝酸盐同化细菌NCT-2为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium),该硝酸盐同化细菌NCT-2保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC),保藏编号为CGMCC No.4698。本发明对环境中硝态氮有很强的同化转化能力,对环境适应性强;此外,还具有溶磷能力。因此该菌在修复设施栽培次生盐渍化土壤和制备微生物肥料上有广阔的应用前景。

    一株秸秆降解放线菌及其应用

    公开(公告)号:CN102703344B

    公开(公告)日:2013-09-25

    申请号:CN201210144682.4

    申请日:2012-05-10

    Abstract: 本发明涉及秸秆降解技术领域,特别涉及一株秸秆降解放线菌及其应用。本发明的秸秆降解放线菌,属于灰略红链霉菌(Streptomyces griseorubens),保藏编号为CGMCC No.5706。与现有技术相比,本发明有以下优点:1、本发明的灰略红链霉菌具有较强的纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶和木质素酶产生能力,不会对自然界的碳循环产生负面影响,不会对环境造成危害;2、本发明的灰略红链霉菌具有较强的秸秆降解能力,在秸秆降解培养基中30天可使秸秆失重率达76%,且培养成本低,操作方便,易于产业化实施;3、本发明的灰略红链霉菌对土壤中的植物病害微生物有一定拮抗作用。

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