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公开(公告)号：CN115029374A
公开(公告)日：2022-09-09
申请号：CN202210729325.8
申请日：2022-06-24
Applicant: 安徽省农业科学院水稻研究所
Abstract: 本发明公开了一种用于骨干载体的pegRNA表达框及相应骨干载体和应用。本发明的骨干载体包括融合蛋白、pegRNA；所述融合蛋白为Cas9切刻酶或其变体、反转录酶组成的融合蛋白。pegRNA包含靶向目的DNA片段的sgRNA、逆转录模板和引物结合位点、连接得到的RNA分子。本发明所述骨干质粒载体中，pegRNA表达框和融合蛋白表达框位于同一双元载体中，pegRNA表达框依次由35S‑CmYLCV‑U6复合启动子、tRNA基因序列、壮观霉素抗性基因SpR、RNA核酶HDV序列、EQ序列和polyT‑HSPt复合终止子组成；Cas9核酸酶表达框由ZmUBI启动子，融合蛋白编码序列和35s终止子依次构成。本发明的enpPE2引导编辑系统不仅大大提高了编辑靶点的编辑效率，并能获得纯合突变植株，具有很好的应用前景。
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公开(公告)号：CN109652422B
公开(公告)日：2022-07-19
申请号：CN201910098590.9
申请日：2019-01-31
Applicant: 安徽省农业科学院水稻研究所
IPC: C12N15/113 , C12N15/82 , C12N5/10
Abstract: 本发明涉及生物技术和植物基因工程技术领域，公开了一种高效的单碱基编辑系统OsSpCas9‑eCDA及其应用。所述单碱基编辑系统OsSpCas9‑eCDA能够对植物基因组进行剪切且具有：(a)SEQ ID No：1所示的核苷酸序列；或者(b)SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个核苷酸且仍能够进行植物基因组剪切的核苷酸序列。本发明提供的单碱基编辑系统OsSpCas9‑eCDA能够在植物特别是水稻中高效地进行由C/G到T/A的单碱基编辑。
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公开(公告)号：CN112522302B
公开(公告)日：2022-04-29
申请号：CN202011459058.4
申请日：2020-12-11
Applicant: 安徽省农业科学院水稻研究所 , 合肥丰乐种业股份有限公司
Abstract: 本发明提供了一种水稻双向单碱基编辑的共转录单元基因ABE‑CBE系统、载体及其应用，所述共转录单元基因ABE‑CBE包括腺嘌呤脱氨酶的编码基因TadA和胞嘧啶脱氨酶编码基因CDA，所述共转录单元基因mutant TadA与LjCDAL1的编码序列构建于同一表达载体中。本发明融合了包含胞嘧啶碱基编辑器和腺嘌呤碱基编辑器的表达载体，造成基因组特异位点的核苷酸替换，实验证明，利用本发明设计的融合编辑工具构建植物表达载体，进而构建水稻靶向编辑载体，导入水稻细胞后造成水稻特异基因位点的DNA上的A:T至G:C相互替换的效率提升，可以在基因的特异位点实现C到T和A到G的同时替换，扩展了应用范围的同时减少了脱靶的产生。使得融合的A‑C base editing系统具有更广泛地应用前景。
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公开(公告)号：CN112725348B
公开(公告)日：2022-04-01
申请号：CN201911029085.5
申请日：2019-10-28
Applicant: 安徽省农业科学院水稻研究所
Abstract: 本发明提供了一种提高水稻碱基编辑效率的基因、方法及其应用。本发明合成了一种含抗潮霉素蛋白的编码基因HPT、SpCas9蛋白的编码基因SpCas9n和腺嘌呤脱氨酶编码基因ABE的共转录单元ABEHPT，还提供包含该ABEHPT的一种表达载体，以及表达载体在水稻基因单碱基编辑方面的应用。将表达载体导入植物体内后，能同时转录和翻译ABE碱基编辑器和潮霉素基因，通过潮霉素筛选，提高植物细胞中ABE碱基编辑器表达量，从而提高植物细胞中ABE碱基编辑效率。实验证明，利用本发明设计的ABEHPT基因构建植物表达载体，进而构建水稻打靶载体，导入水稻细胞后造成水稻特异基因位点的DNA上的A:T突变成G:C定点替换的效率大幅提升，在高效获得单碱基替换植株方面具有重要的应用价值。
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公开(公告)号：CN111690650B
公开(公告)日：2022-03-25
申请号：CN202010619913.7
申请日：2020-06-30
Applicant: 安徽省农业科学院水稻研究所
Abstract: 本发明提供一种植物热诱导表达启动子Posheat5及其应用。本发明还提供了含有该启动子的表达盒、植物表达载体、宿主菌和转化子。具体而言，本发明获得了上述启动子并将上述启动子应用在植物转基因工程中。本发明提供的启动子可以在热诱导的条件下驱动外源基因在植物中表达，适用于单子叶禾谷类植物，尤其能够驱动外源基因在水稻植株中诱导表达，因此可以用于提高和改善水稻的生长特性，从而培育出理想的耐热水稻品种。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112746084A
公开(公告)日：2021-05-04
申请号：CN201911054343.5
申请日：2019-10-31
Applicant: 安徽省农业科学院水稻研究所
Abstract: 本发明提供了一种实现单轮筛选全阳性的肉眼可视水稻基因筛选方法，所述方法包括培养愈伤组织；合成序列表中SEQ ID No.1中所示序列的筛选标记基因，扩增后连接于载体中形成植物表达载体，转入根癌农杆菌；将愈伤组织与农杆菌接触10‑30分钟，其中，所述农杆菌中引入了所述植物表达载体，所述植物表达载体中携带所述筛选标记基因；进行愈伤组织培养；取带有颜色、状态良好的愈伤组织进行分化再生。并且本发明提供一种表达盒和一种表达载体，以及该表达盒和表达载体在遗传转化方面的应用。本发明利用Cb基因构建植物表达载体，导入水稻细胞后造成水稻转化阳性愈伤呈深绿色。
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公开(公告)号：CN112626049A
公开(公告)日：2021-04-09
申请号：CN202011481713.6
申请日：2020-12-14
Applicant: 安徽省农业科学院水稻研究所
Abstract: 本发明提供了一种在水稻基因打靶中识别特异位点的SpCas9‑NRRH基因及其应用。本发明在水稻基因打靶实验过程中，意外获得了一种新的SpCas9‑NRRH突变体，发现利用该SpCas9‑NRRH突变体进行水稻剪切，能够识别特异位点。并且本发明提供一种基于该基因构建的表达盒和一种表达载体，以及该表达盒和表达载体在水稻基因编辑方面的应用。本发明利用所获得的SpCas9‑NRRH构建植物表达载体，构建水稻打靶载体，导入水稻细胞后造成水稻特异基因位点的DNA双链剪切，实现了水稻基因打靶，并且以高突变效率获得转基因水稻植株。
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公开(公告)号：CN107267509B
公开(公告)日：2020-12-04
申请号：CN201710450947.6
申请日：2017-06-15
Applicant: 安徽省农业科学院水稻研究所
IPC: C12N15/113 , C12N15/82 , A01H5/00 , A01H6/46
Abstract: 本发明提供了一种植物双重特性表达启动子，所述启动子不仅能够驱动目的基因在种子中特异表达，而且能够在干旱诱导条件下调控目的基因集中表达。本发明的干旱诱导型组织特异性表达启动子包含：如序列表SEQ ID No：1中所述的核苷酸序列或其衍生物。本发明还提供了利用该启动子而构建的重组表达载体、表达盒以及其在植物培育中的应用。通过将本发明的启动子连接到待表达的基因并利用载体转入到植物植株中，能够在非干旱时诱导种子发育，在干旱条件下驱动外源基因在植物的各个部位中表达。
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公开(公告)号：CN107142262B
公开(公告)日：2020-08-11
申请号：CN201710500111.2
申请日：2017-06-27
Applicant: 安徽省农业科学院水稻研究所
IPC: C12N15/113 , C12N15/84 , C12N5/10 , A01H5/10 , A01H6/46
Abstract: 本发明提供一种水稻种子特异性启动子Posseed及其应用。所述水稻种子特异性启动子包含序列表中SEQ ID No:1所示的DNA序列。序列表中SEQ ID No:1所示的DNA序列来源于日本晴水稻(Oryza sativa L cv.Nipponbare)，本文中称为Posseed或启动子Posseed。本发明还提供了含有该启动子的表达盒、植物表达载体和宿主菌。具体而言，本发明将上述启动子应用在植物转基因工程中。本发明提供的启动子可以启动外源基因在植物中表达，适用于任何植物，尤其能够驱动外源基因在水稻植株的种子种特异表达，因此可以用于培育理想的水稻品种，或用于生物反应器研究中。
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公开(公告)号：CN107099534B
公开(公告)日：2020-04-24
申请号：CN201710500093.8
申请日：2017-06-27
Applicant: 安徽省农业科学院水稻研究所
IPC: C12N15/113 , C12N15/84 , A01H5/10 , A01H6/46
Abstract: 本发明提供一种在植物生长的特定时期内表达的水稻种子特异性启动子，其核苷酸序列如SEQ ID No:1所示，所述启动子在种子发育过程中能够驱动目标基因特异表达，但当种子成熟后至干种子时，驱动活性消失。本发明还提供了含有该启动子的表达盒和植物表达载体及应用。具体而言，本发明将上述启动子应用在植物转基因工程中，该启动子可以启动外源基因在植物中表达，适用于任何植物，尤其能够驱动外源基因在水稻植株的种子发育过程中特异表达，因此可以用于培育理想的水稻品种，提高水稻产量和品质。
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