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公开(公告)号：CN114250217B
公开(公告)日：2023-11-28
申请号：CN202111478385.9
申请日：2021-12-06
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种理性设计提升腈水解酶活性的方法及应用，属于酶工程领域。本发明通过腈水解酶的晶体结构进行分析，通过底物对接确定了催化口袋附近与催化活性相关的位点，对每个点做饱和突变后，通过两种计算方法Rosetta‑Cartesian和FEP对获得的突变体进行稳定性和结合自由能分析，对满足要求的突变体做酶活测定。将单点突变酶活高于野生型的位点进行组合突变再进行计算，最终获得符合要求的突变体进行酶活测定。通过这种方法我们最后获得了两个单点突变体，比酶活为野生型的2、1.5倍，组合突变体F64YW170G比酶活为野生型的4.56倍。
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公开(公告)号：CN114277022B
公开(公告)日：2023-08-08
申请号：CN202111465494.7
申请日：2021-12-03
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高活性和高热稳定性的腈水合酶突变体，属于生物工程技术领域。本发明对腈水合酶氨基酸基序中β亚基上的第50位谷氨酸突变为亮氨酸得到突变体E50L，本发明提供的突变体E50L催化烟腈的比酶活提高到353.53±22.34U/mg，比野生型提高了5.83倍。在提高酶活的同时，突变体保持了Pt NHase热稳定性良好的优势且耐受性有一定的提高。兼具较高酶活、良好热稳定性以及底物耐受性的突变体的成功构建，增强了研究者对于理性设计方法改造蛋白提高酶活的信心，进一步推动后续Pt NHase的工业化生产应用。
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公开(公告)号：CN115322981B
公开(公告)日：2023-07-25
申请号：CN202210399507.3
申请日：2020-11-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种腈水合酶突变体及其在制备酰胺类化合物中的应用，属于基因工程和酶工程领域。本发明提供的腈水合酶突变体Str.t NHase‑βL48D在65℃的半衰期大约是43分钟，相比其他NHase酶热稳定性有显著提高。采用本发明的技术方案，对于以烟腈、丙烯腈、苯甲腈、2‑氰基吡嗪腈、异丁腈、正戊腈、肉桂腈等腈类化合物为底物的反应，其底物耐受性得到了明显的提高。
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公开(公告)号：CN113846040B
公开(公告)日：2023-07-25
申请号：CN202111060419.2
申请日：2021-09-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了协同两类腈水合酶高效催化烟酰胺及丙烯酰胺生物合成的方法，属于生物工程领域。本发明构建了一种基因工程菌，兼具高分子量腈水合酶对腈类物质和酰胺类物质有较高的耐受性，和，低分子量腈水合酶相仿的反应速率，能够高效生产烟酰胺及丙烯酰胺。本发明通过全细胞催化法，以烟腈及丙烯腈为底物，添加终浓度OD600值为8的基因工程菌，催化生成附加值更高的烟酰胺及丙烯酰胺，烟酰胺产量可达375～516g/L，丙烯酰胺产量达到240.8g/L。
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公开(公告)号：CN116083408A
公开(公告)日：2023-05-09
申请号：CN202310092339.8
申请日：2023-02-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种中性pH下高活性的L‑谷氨酸α‑脱羧酶突变体，属于酶工程技术领域。本发明通过一步脱羧反应生成GABA通过底物对接确定了催化口袋附近与催化活性相关的位点，利用CAST建库NNK突变，通过已构建的GABA传感器作为初筛工具，利用荧光强度作为筛选依据，将获得的有效果(荧光强度高的)的三个库的位点进行组合突变，再利用传感器进行两次迭代筛选，获得了在中性pH环境下酶活提高的L‑谷氨酸α‑脱羧酶突变体。本发明构建的突变体在中性条件下比酶活为野生的型64倍，有利于工业化生产GABA。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN116064347A
公开(公告)日：2023-05-05
申请号：CN202211023503.1
申请日：2022-08-25
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种动态代谢调控大肠杆菌发酵制备α‑酮异戊酸的方法，属于生物工程领域。本发明构建的重组大肠杆菌含有基于CRISPRi技术及降解标签建立的动态调控菌体生长代谢途径和平衡辅酶循环系统；能够以廉价的葡萄糖为碳源，以无机盐为氮源，发酵生成附加值高的α‑酮异戊酸，在两阶段发酵的发酵策略下，发酵60hα‑酮异戊酸产量可达35.2g/L，具备工业化应用的前景。
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公开(公告)号：CN112322607B
公开(公告)日：2023-03-28
申请号：CN202011307749.2
申请日：2020-11-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种融合型腈水合酶及其应用，属于基因工程领域和酶工程领域。本发明公开了多种稳定性提高的亚基融合型腈水合酶，属于基因工程领域。本发明将来源于Pseudomonas putida NRRL 1886的腈水合酶作为初始对象，分别通过不同种类不同长度Linker融合其β亚基和α亚基，得到多种亚基融合型腈水合酶，稳定性得到显著提高。本发明方法简单高效，不仅得到了稳定性显著提高的腈水合酶可用于工业生产，还总结了基因融合影响腈水合酶稳定性的规律，为提高腈水合酶稳定性提高理论研究。
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公开(公告)号：CN112501193B
公开(公告)日：2022-09-27
申请号：CN202011446330.5
申请日：2020-12-09
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/70 , C12N15/65 , C12N15/55 , C12N15/60 , C12N1/21 , C12Q1/02 , C12Q1/34 , C12Q1/527 , C12Q1/6897 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种烟酸及烟酰胺生物传感系统，属于基因工程技术领域。本发明将枯草芽孢杆菌转录阻遏蛋白NadR及其靶标启动子异源构建到大肠杆菌。通过对NadR进行基于易错PCR的定向进化筛选，得到响应合适浓度烟酸的NadR突变体L171F，并利用该突变体构建在所需浓度范围内高灵敏响应烟酸的生物传感系统，可使生物传感系统在0‑50mM范围内高灵敏响应烟酸浓度。进一步通过在该系统中过表达能将烟酰胺转化为烟酸的烟酰胺酶PncA，使得该系统可以间接感受烟酰胺浓度。
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公开(公告)号：CN114790452A
公开(公告)日：2022-07-26
申请号：CN202210399511.X
申请日：2020-11-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种对腈类化合物具有高稳定性的腈水合酶突变体，属于基因工程和酶工程领域。本发明提供的腈水合酶突变体Str.t NHase‑βL48D在65℃的半衰期大约是43分钟，相比其他NHase酶热稳定性有显著提高。采用本发明的技术方案，对于以烟腈、丙烯腈、苯甲腈、2‑氰基吡嗪腈、异丁腈、正戊腈、肉桂腈等腈类化合物为底物的反应，其底物耐受性得到了明显的提高。
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公开(公告)号：CN114214308A
公开(公告)日：2022-03-22
申请号：CN202111476802.6
申请日：2021-12-06
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种经半理性改造提升活性的腈水解酶突变体，属于酶工程领域。本发明为了提高腈水解酶PCC6803酶活，通过底物对接确定了催化口袋附近与催化活性相关的位点，利用CAST建库NNK突变，通过已构建的烟酸传感器作为初筛工具，利用荧光强度作为筛选依据，将获得的有效果(荧光强度低的)的两个库的位点进行组合突变，再利用传感器进行筛选，然后将荧光强度低的突变体重新构建至表达载体及宿主中表达及纯化，利用HPLC测定纯酶比酶活，最终获得比酶活比野生酶WT提高了57％、180％、555％的突变体。
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