公开(公告)号：CN114107269B

公开(公告)日：2024-03-01

申请号：CN202111395709.2

申请日：2021-11-23

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  程中一 ,  印猛 ,  马东 ,  刘中美 ,  崔文璟 ,  周丽 ,  韩来闯 ,  郭军玲

IPC: C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12P13/02

Abstract: 本发明提供了一种腈水合酶氨基酸基序的改造及其应用，属于生物工程技术领域。所述基序在α亚基上酶活中心的108、111和113位点均是高度保守的，它们分别与钴离子形成配位键。通过序列与结构比对，其他来源的腈水合酶在这些对应的氨基酸残基位点也是高度保守的。本发明通过将所述将腈水合酶β亚基上的第129号位的丙氨酸进行突变，得到突变体A129R的比酶活较野生型显著提升，且底物谱较野生型拓宽，对于异丁腈、正戊腈、烟腈、2‑氰基吡嗪、苯甲腈、肉桂腈、1‑萘甲腈和噻虫啉等具有较好的催化活性。

公开(公告)号：CN114277022B

公开(公告)日：2023-08-08

申请号：CN202111465494.7

申请日：2021-12-03

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  程中一 ,  印猛 ,  张苇苗 ,  刘中美 ,  崔文璟 ,  周丽 ,  韩来闯 ,  郭军玲

IPC: C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12P13/02 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种高活性和高热稳定性的腈水合酶突变体，属于生物工程技术领域。本发明对腈水合酶氨基酸基序中β亚基上的第50位谷氨酸突变为亮氨酸得到突变体E50L，本发明提供的突变体E50L催化烟腈的比酶活提高到353.53±22.34U/mg，比野生型提高了5.83倍。在提高酶活的同时，突变体保持了Pt NHase热稳定性良好的优势且耐受性有一定的提高。兼具较高酶活、良好热稳定性以及底物耐受性的突变体的成功构建，增强了研究者对于理性设计方法改造蛋白提高酶活的信心，进一步推动后续Pt NHase的工业化生产应用。

公开(公告)号：CN114277022A

公开(公告)日：2022-04-05

申请号：CN202111465494.7

申请日：2021-12-03

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  程中一 ,  印猛 ,  张苇苗 ,  刘中美 ,  崔文璟 ,  周丽 ,  韩来闯 ,  郭军玲

IPC: C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12P13/02 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种高活性和高热稳定性的腈水合酶突变体，属于生物工程技术领域。本发明对腈水合酶氨基酸基序中β亚基上的第50位谷氨酸突变为亮氨酸得到突变体E50L，本发明提供的突变体E50L催化烟腈的比酶活提高到353.53±22.34U/mg，比野生型提高了5.83倍。在提高酶活的同时，突变体保持了Pt NHase热稳定性良好的优势且耐受性有一定的提高。兼具较高酶活、良好热稳定性以及底物耐受性的突变体的成功构建，增强了研究者对于理性设计方法改造蛋白提高酶活的信心，进一步推动后续Pt NHase的工业化生产应用。

公开(公告)号：CN114107269A

公开(公告)日：2022-03-01

申请号：CN202111395709.2

申请日：2021-11-23

Applicant: 江南大学

Inventor： 周哲敏 ,  程中一 ,  印猛 ,  马东 ,  刘中美 ,  崔文璟 ,  周丽 ,  韩来闯 ,  郭军玲

IPC: C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12P13/02

Abstract: 本发明提供了一种腈水合酶氨基酸基序的改造及其应用，属于生物工程技术领域。所述基序在α亚基上酶活中心的108、111和113位点均是高度保守的，它们分别与钴离子形成配位键。通过序列与结构比对，其他来源的腈水合酶在这些对应的氨基酸残基位点也是高度保守的。本发明通过将所述将腈水合酶β亚基上的第129号位的丙氨酸进行突变，得到突变体A129R的比酶活较野生型显著提升，且底物谱较野生型拓宽，对于异丁腈、正戊腈、烟腈、2‑氰基吡嗪、苯甲腈、肉桂腈、1‑萘甲腈和噻虫啉等具有较好的催化活性。