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公开(公告)号：CN101173296B
公开(公告)日：2011-04-13
申请号：CN200710133803.4
申请日：2007-10-22
Applicant: 扬州大学
Abstract: 广谱细菌宿主绿色荧光蛋白表达载体的构建方法，涉及微生物学领域。技术方案是：PCR扩增氨苄青霉素抗性基因的Amp启动子，将Amp启动子与绿色荧光蛋白结构基因连接，得到以其启动绿色荧光蛋白表达的广谱型原核表达载体。本发明利用能在细菌中广泛发挥作用的氨苄青霉素抗性基因(Amp)的启动子构建了一种广谱型GFP表达载体，所构建的载体表达GFP不受细菌型别和种类的限制，也不受细菌生长环境的限制，只要转化进细菌细胞，即可发挥作用，表达GFP，因而大大扩展了应用领域。
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公开(公告)号：CN102382844A
公开(公告)日：2012-03-21
申请号：CN201110293170.X
申请日：2011-10-07
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及医学微生物学领域，具体涉及一种淋病奈瑟菌免疫阻遏基因Δrmp及突变方法。所述淋病奈瑟菌免疫阻遏突变基因Δrmp，它的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示。该突变基因通过下述方法和得：是以淋病奈瑟菌基因组DNA为模板，PCR扩增rmp基因，并连接到T载体pMD19中，以连接产物pMD19rmp为模板，扩增包含rmp基因下游侧翼区、pMD19载体骨架和rmp基因上游侧翼区的线性DNA片段，与相同酶切处理的卡那霉素抗性基因Kanr连接，得到的突变基因Δrmp。
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公开(公告)号：CN105463003A
公开(公告)日：2016-04-06
申请号：CN201510920436.7
申请日：2015-12-11
Applicant: 扬州大学
CPC classification number: C12N15/63 , C12N15/66 , C12N2800/101 , C12N2810/10
Abstract: 本发明提供了一种消除卡那霉素耐药基因活性的重组载体,以消除生物体内耐药细菌，解决细菌具有卡那霉素耐药性的问题。所述消除卡那霉素耐药基因活性的重组载体的特征在于，包括消除了氯霉素抗性的pCas9载体和针对卡那霉素抗性基因kan的gRNA核酸序列：KR58或KR208，其具体核酸序列分别如下：KR58：GCCGCGAT TAAATTCCAACA或KR208：CAATGATG TTACAGATGAGA。其构建方法主要包括：利用基因编辑新工具CRISPR/Cas9系统携带该间区核酸，去除重组载体上的氯霉素抗性基因后转化入减毒沙门菌等疫苗载体菌，重组菌与卡那霉素耐药菌共培养，重组菌细胞内的重组载体通过接合方式进入卡那霉素耐药菌，有效抑制卡那霉素抗性基因kan的活性，使原来耐药的细菌在卡那霉素培养基上不能生长。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102382844B
公开(公告)日：2012-11-21
申请号：CN201110293170.X
申请日：2011-10-07
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及医学微生物学领域，具体涉及一种淋病奈瑟菌免疫阻遏基因Δrmp及突变方法。所述淋病奈瑟菌免疫阻遏突变基因Δrmp，它的核苷酸序列如SEQIDNO.10所示。该突变基因通过下述方法获得：是以淋病奈瑟菌基因组DNA为模板，PCR扩增rmp基因，并连接到T载体pMD19中，以连接产物pMD19rmp为模板，扩增包含rmp基因下游侧翼区、pMD19载体骨架和rmp基因上游侧翼区的线性DNA片段，与相同酶切处理的卡那霉素抗性基因Kanr连接，得到的突变基因Δrmp。
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公开(公告)号：CN101173296A
公开(公告)日：2008-05-07
申请号：CN200710133803.4
申请日：2007-10-22
Applicant: 扬州大学
Abstract: 广谱细菌宿主绿色荧光蛋白表达载体的构建方法，涉及微生物学领域。技术方案是：PCR扩增氨苄青霉素抗性基因的Amp启动子，将Amp启动子与绿色荧光蛋白结构基因连接，得到以其启动绿色荧光蛋白表达的广谱型原核表达载体。本发明利用能在细菌中广泛发挥作用的氨苄青霉素抗性基因(Amp)的启动子构建了一种广谱型GFP表达载体，所构建的载体表达GFP不受细菌型别和种类的限制，也不受细菌生长环境的限制，只要转化进细菌细胞，即可发挥作用，表达GFP，因而大大扩展了应用领域。
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公开(公告)号：CN101173280A
公开(公告)日：2008-05-07
申请号：CN200710133804.9
申请日：2007-10-22
Applicant: 扬州大学
Abstract: 人膜协同因子蛋白小基因pMCP的构建方法，涉及病原生物学领域。首先以人血细胞基因组DNA为模板，采用PCR方法，克隆人膜协同因子蛋白基因的启动子；以pSG5－MCP为模板扩增人膜协同因子蛋白cDNA；然后采用重叠PCR方法将MCP启动子和cDNA拼接起来，用获得的DNA片段替换出pcDNA3.1中的CMV启动子，构建成人膜协同因子蛋白小基因pMCP。通过本发明方法建立的转基因小鼠可改变以往人类特异性病原体感染性疾病研究中缺乏理想动物模型的局面，突破相应病原体感染致病机理、疫苗评价、药物评价等方面的限制。
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公开(公告)号：CN106492211A
公开(公告)日：2017-03-15
申请号：CN201610804927.X
申请日：2016-09-06
Applicant: 扬州大学
IPC: A61K39/095 , A61K39/112 , A61K47/46 , A61P31/04 , A61P13/00
CPC classification number: Y02A50/482 , A61K39/095 , A61K39/0275 , A61K2039/523 , A61K2039/55594 , A61K2039/575
Abstract: 本发明提供一种淋病奈瑟菌-沙门菌双效疫苗，其中，沙门菌菌影作为递送载体负载淋病奈瑟菌PorB DNA疫苗；以及其制备方法和应用。主要包括以下步骤：1)以淋病奈瑟菌基因组为模板，通过PCR扩增出孔蛋白B(PorB)基因并构建PorB DNA疫苗；2)构建温控表达载体pB-E，并将其转化到沙门菌感受态中获得重组菌SE(pB-E)，经温度诱导制得沙门菌菌影疫苗冻干粉；3)将淋病奈瑟菌PorB DNA疫苗与沙门菌菌影冻干粉孵育，得到沙门菌菌影负载的淋病奈瑟菌PorB的菌影疫苗SE ghost(PorB)。该双效疫苗安全性良好、能同时诱导机体产生和提高针对淋病奈瑟菌和沙门菌的特异性体液免疫应答、黏膜免疫应答，并具有较高的抗体水平；在淋病和/或沙门菌防治方面具有重大意义。
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公开(公告)号：CN103060363A
公开(公告)日：2013-04-24
申请号：CN201310031718.2
申请日：2013-01-28
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及医学微生物学领域，具体涉及一种淋病奈瑟菌的转化方法。该方法是将淋病奈瑟菌分别经液体及固体培养基培养后，收集细菌于离心管中；细菌经冰浴静置、充分洗涤和悬浮后制得淋病奈瑟菌感受态作为转化用受体菌备用；通过电转化方法将原核表达载体转入到上述备用的淋病奈瑟菌感受态中，用酶切和PCR方法筛选鉴定重组淋病奈瑟菌。本发明通过优化淋病奈瑟菌的培养条件，制备了淋病奈瑟菌感受态，建立了淋病奈瑟菌的转化方法，此转化方法简便易行，获得的重组菌性质稳定，为今后淋病奈瑟菌感染机制和疫苗效果的研究奠定了基础。同时，该转化方法的建立进一步拓宽了淋病奈瑟菌的研究领域。
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