公开(公告)号：CN101818127A

公开(公告)日：2010-09-01

申请号：CN201010138769.1

申请日：2010-03-31

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 宋锐 ,  曹鸿国 ,  陶勇 ,  章孝荣 ,  张运海 ,  李运生 ,  殷慧群 ,  刘亚 ,  方富贵 ,  刘旭光 ,  任春环 ,  张子军 ,  丁建平

IPC: C12N5/076

Abstract: 本发明公开了一种小鼠精原干细胞分离培养方法，利用中性蛋白酶消化性质温和、高效、对细胞刺激性小的特点分离小鼠精原干细胞，将小鼠精原干细胞的富集步骤与传代有机结合，使用中性蛋白消化贴壁的小鼠精原干细胞集落，达到较好的富集效果。本发明具有分离培养操作简单，时间短，效果好，且成本低的特点。

公开(公告)号：CN102229909A

公开(公告)日：2011-11-02

申请号：CN201010138766.8

申请日：2010-03-31

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 曹鸿国 ,  章孝荣 ,  张运海 ,  李运生 ,  殷慧群 ,  陶勇 ,  刘亚 ,  方富贵 ,  刘旭光 ,  任春环 ,  张子军 ,  丁建平 ,  刘洪瑜 ,  王力生

IPC: C12N5/073 ,  C12N15/62 ,  C12N15/867 ,  C12N7/01

Abstract: 本发明公开了一种牛诱导性多能干细胞诱导方法，利用外源限定因子与增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein，EGFP)报告基因构建融合蛋白慢病毒表达载体用于牛诱导性多能干细胞的诱导，对表达外源限定因子融合蛋白的牛胎儿成纤维细胞进行培养传代，逐步分离培养出集落边缘界限清晰的细胞克隆，细胞集落生长状态稳定，核型正常，碱性磷酸酶检测为阳性，免疫细胞化学检测显示Oct4、Nanog、SSEA-1蛋白表达为阳性，体内能够分化形成含有三个胚层的畸胎瘤，结果证实分离培养的细胞克隆具有胚胎干细胞样特征，得到牛诱导性多能干细胞。

公开(公告)号：CN101955910A

公开(公告)日：2011-01-26

申请号：CN201010138753.0

申请日：2010-03-31

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 张运海 ,  曹鸿国 ,  章孝荣 ,  李运生 ,  殷慧群 ,  孙雪萍 ,  薛奕杰 ,  张卫琴 ,  黄伟玲 ,  陈涛 ,  宋锐 ,  陶勇 ,  刘亚 ,  方富贵 ,  刘旭光 ,  任春环 ,  张子军 ,  殷宗俊 ,  丁建平

IPC: C12N5/073 ,  C12N15/62 ,  C12N15/867 ,  C12N7/01

Abstract: 本发明公开了一种猪诱导性多能干细胞诱导方法，利用外源限定因子与增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein，EGFP)报告基因构建融合蛋白慢病毒表达载体用于猪诱导性多能干细胞的诱导，对表达外源限定因子融合蛋白的猪胎儿成纤维细胞进行培养传代，逐步分离培养出集落边缘界限清晰的细胞克隆，细胞集落生长状态稳定，核型正常，碱性磷酸酶检测为阳性，免疫细胞化学检测显示Oct4、Nanog、SSEA-1蛋白表达为阳性，体内能够分化形成含有三个胚层的畸胎瘤，分离培养的细胞克隆得到猪诱导性多能干细胞。

公开(公告)号：CN102321658A

公开(公告)日：2012-01-18

申请号：CN201110204153.4

申请日：2011-07-20

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 曹鸿国 ,  殷慧群 ,  章孝荣 ,  孙雪萍 ,  杨盼 ,  蒲勇 ,  张运海 ,  刘亚 ,  陶勇 ,  方富贵 ,  李运生 ,  任春环 ,  张子军 ,  丁建平 ,  刘洪瑜

IPC: C12N15/70 ,  C12N5/073 ,  C07K14/47 ,  C07K19/00

Abstract: 本发明公开了一种猪体细胞的重组蛋白诱变方法。其方法是构建细胞穿透肽外源限定因子的重组蛋白用于猪体细胞的诱导，从细菌中提取并纯化细胞穿透肽外源限定因子的重组蛋白，将限定因子重组蛋白添加到猪体细胞培养液中进行诱变，细胞穿透肽外源限定因子的重组蛋白能够进入猪体细胞中，在干细胞培养条件下能够逐渐形成集落边缘界限清晰的细胞集落，细胞集落中的单个细胞呈现圆形、细胞核较大且在细胞内所占比例较高，集落内细胞表达碱性磷酸酶和干细胞特异性分子标记Oct 4和Nanog。本发明证实限定因子重组蛋白能够使猪体细胞在形态、生长方式、基因表达等方面发生诱变作用。

公开(公告)号：CN101818127B

公开(公告)日：2011-12-28

申请号：CN201010138769.1

申请日：2010-03-31

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 宋锐 ,  曹鸿国 ,  陶勇 ,  章孝荣 ,  张运海 ,  李运生 ,  殷慧群 ,  刘亚 ,  方富贵 ,  刘旭光 ,  任春环 ,  张子军 ,  丁建平

IPC: C12N5/076

Abstract: 本发明公开了一种小鼠精原干细胞分离培养方法，利用中性蛋白酶消化性质温和、高效、对细胞刺激性小的特点分离小鼠精原干细胞，将小鼠精原干细胞的富集步骤与传代有机结合，使用中性蛋白消化贴壁的小鼠精原干细胞集落，达到较好的富集效果。本发明具有分离培养操作简单，时间短，效果好，且成本低的特点。

公开(公告)号：CN102174466A

公开(公告)日：2011-09-07

申请号：CN201110008808.0

申请日：2011-01-14

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 曹鸿国 ,  章孝荣 ,  刘亚 ,  张运海 ,  陶勇 ,  方富贵 ,  殷慧群 ,  孙雪萍 ,  薛奕杰 ,  张卫琴 ,  黄伟玲 ,  陈涛 ,  李运生 ,  任春环 ,  张子军 ,  丁建平 ,  刘洪瑜 ,  刘旭光 ,  王力生

IPC: C12N5/071 ,  C12N5/10 ,  C12N7/01 ,  C12N15/867

Abstract: 本发明公开了一种猪体细胞诱变方法，利用携带增强型绿色荧光蛋白标记的慢病毒多次感染作用胎猪成纤维细胞，在干细胞培养液的生长环境条件下胎猪成纤维细胞逐步改变原有的纤维状生长形态，形成鸟巢状细胞集落，分离培养传代的细胞集落边缘界限清晰，生长状态稳定，核型正常，碱性磷酸酶表达为阳性，免疫细胞化学检测显示Oct4、Nanog、SSEA-1蛋白表达为阳性，体内分化形成含有三个胚层的畸胎瘤，结果证实慢病毒作用下发生诱变的猪体细胞具有干细胞特征。