一种分离纯化谷胱甘肽过氧化物酶的方法

    公开(公告)号:CN105039275A

    公开(公告)日:2015-11-11

    申请号:CN201510582302.9

    申请日:2015-09-14

    CPC classification number: C12N9/0065 C12Y111/01009

    Abstract: 一种分离纯化谷胱甘肽过氧化物酶的方法,涉及利用双向电泳技术在金山绣线菊中分离纯化谷胱甘肽过氧化物酶的方法。通过该技术分离纯化此酶,比传统的柱层析等方法具有更高的精确性、可操作性和先进性。方法:一、金山绣线菊梯度低温处理;二、金山绣线菊叶片蛋白提取;三、蛋白定量与纯化;四、第一向固相PH梯度等电聚焦电泳;五、第二向SDS-PAGE凝胶电泳;六、凝胶平衡与染色;七、凝胶扫描和图像分析;八、目标蛋白酶解与脱水;九、目标蛋白重结晶与纯化,完成分离纯化过程。用该方法使提取的蛋白酶具更高纯度、更多数量和更优科研价值,此方法提取纯化蛋白酶可用于酶活性、氧化还原与清除氧自由基机理、抗逆机制、抗逆基因克隆、蛋白组学等研究。

    厚壳贻贝谷胱甘肽过氧化物酶--一种新型的海洋污染检测标记物

    公开(公告)号:CN108913670A

    公开(公告)日:2018-11-30

    申请号:CN201810737728.0

    申请日:2018-07-06

    CPC classification number: C12N9/0065 C12Q1/6888 C12Q2600/158 C12Y111/01009

    Abstract: 本发明公开了厚壳贻贝谷胱甘肽过氧化物酶基因,其为克隆基因,通过基因克隆技术获得。本发明还公开一种新型海洋生物污染检测标记物,用厚壳贻贝作为检测海洋污染的生物样本,厚壳贻贝谷胱甘肽过氧化物酶基因用作海洋污染的检测标记物。本发明通过基因克隆技术获得的厚壳贻贝谷胱甘肽过氧化物酶基因,其在厚壳贻贝的消化腺中的相对表达量最高,克隆用引物合适、能增大PCR反应的成功性,克隆用裂解液能够保持所得总RNA的完整性、提高总RNA的得率和纯度;本发明利用厚壳贻贝谷胱甘肽过氧化物酶用作新型海洋生物污染检测标记物,该检测标记物特异性强,灵敏度高。

    一种过氧化物纳米酶及其制备方法

    公开(公告)号:CN106011125A

    公开(公告)日:2016-10-12

    申请号:CN201610403772.9

    申请日:2016-06-08

    Applicant: 吉林大学

    CPC classification number: C12N11/14 C12N9/0065 C12Y111/01009

    Abstract: 一种过氧化物纳米酶及其制备方法,属于纳米生物技术领域。是以金纳米粒子为载体,利用生物活性五肽(URGDC)进行自组装,五肽分子中巯基与金纳米粒子配位共价偶联,得到具有高GPx活性的过氧化物纳米酶。此方法简便易于操作,并且具有良好的稳定性。生物活性五肽的氨基酸序列为Sec‑Arg‑Gly‑Asp‑Cys(简称URGDC)。其中Sec(U)中含有酶的活性中心;Arg‑Gly‑Asp(RGD)能促进纳米酶与底物的结合,Cys(C)侧链中的巯基可以和金纳米粒子共价连接。金纳米粒子的应用是作为一种载体固定生物活性五肽,促进纳米酶与底物的充分接触,提高谷胱甘肽过氧化物酶的活力。

    一种含有更多丝氨酸的谷胱甘肽过氧化物酶GPX1突变体及其制备方法

    公开(公告)号:CN103898073A

    公开(公告)日:2014-07-02

    申请号:CN201410136649.6

    申请日:2013-07-18

    Applicant: 吉林大学

    Inventor: 宋健 魏景艳 郭笑

    CPC classification number: C12N9/0065 C12N15/70 C12Y111/01009

    Abstract: 一种含有更多丝氨酸的谷胱甘肽过氧化物酶GPX1突变体及其制备方法,属于生物技术领域。先用基因突变或合成法获得突变体基因,再通过营养缺陷型原核表达系统或营养缺陷型和SPP低温联合表达系统,将GPX的催化基团SeCys引入到突变体的底物结合部位,结果赋予其高的GPX的活性;或者先将靶基因连同SeCys插入序列组装到分泌型哺乳类细胞表达载体上,再将SeCys插入序列结合蛋白2组装到胞内型哺乳类细胞表达载体上,将两种载体共转染同一哺乳细胞株,在亚硒酸钠存在下用哺乳细胞合成GPX。本发明方法简单,突变体活力和产量高、稳定性好,避免包涵体复性造成的产率下降和失活,从而解决天然GPX来源有限和性质不稳定问题。

    用真核分泌表达系统制备重组谷胱甘肽过氧化物酶的方法

    公开(公告)号:CN104059894A

    公开(公告)日:2014-09-24

    申请号:CN201410331142.6

    申请日:2013-04-24

    Applicant: 吉林大学

    CPC classification number: C12N9/0065 C12N15/85 C12Y111/01009

    Abstract: 本发明的用真核分泌表达系统制备重组谷胱甘肽过氧化物酶的方法,属于生物技术的领域。先将靶基因连同SeCys插入序列组装到分泌型哺乳类细胞表达载体上,再将SeCys插入序列结合蛋白2组装到胞内型哺乳类细胞表达载体上,将两种载体共转染同一哺乳细胞株,在亚硒酸钠存在下用哺乳细胞合成GPX。本发明方法简单,重组GPX活力和产量高、稳定性好,避免包涵体复性造成的产率下降和失活,从而解决天然GPX来源有限和性质不稳定问题。

    新型高活力谷胱甘肽过氧化物酶GPX突变体及其制备方法

    公开(公告)号:CN103898075A

    公开(公告)日:2014-07-02

    申请号:CN201410159032.6

    申请日:2014-04-19

    Applicant: 吉林大学

    CPC classification number: C12N9/0065 C12N15/70 C12N15/85 C12Y111/01009

    Abstract: 新型高活力谷胱甘肽过氧化物酶GPX突变体及其制备方法,属于生物技术领域,涉及序列SEQ?ID?No:1~38。其是先用基因突变或合成法获得突变体基因,再通过营养缺陷型原核表达系统或营养缺陷型和SPP低温联合表达系统,将GPX的催化基团SeCys引入到突变体的底物结合部位,赋予其高的GPX的活性;或者先将靶基因连同SeCys插入序列组装到分泌型哺乳类细胞表达载体上,再将SeCys插入序列结合蛋白2组装到胞内型哺乳类细胞表达载体上,将两种载体共转染同一哺乳细胞株,在亚硒酸钠存在下用哺乳细胞合成GPX。本发明方法简单,突变体活力和产量高、稳定性好,从而解决天然GPX来源有限和性质不稳定问题。

    一种含有两个以上催化基团的谷胱甘肽过氧化物酶GPX1突变体及其制备方法

    公开(公告)号:CN103898074A

    公开(公告)日:2014-07-02

    申请号:CN201410138374.X

    申请日:2013-07-18

    Applicant: 吉林大学

    Inventor: 魏景艳 郭笑 宋健

    CPC classification number: C12N9/0065 C12N15/70 C12Y111/01009

    Abstract: 一种含有两个以上催化基团的谷胱甘肽过氧化物酶GPX1突变体及其制备方法,属于生物技术领域。先用基因突变或合成法获得突变体基因,再通过营养缺陷型原核表达系统或营养缺陷型和SPP低温联合表达系统,将两个或多个GPX的催化基团SeCys引入到突变体的底物结合部位,结果赋予其高的GPX活性;或者先将靶基因连同SeCys插入序列组装到分泌型哺乳类细胞表达载体上,再将SeCys插入序列结合蛋白2组装到胞内型哺乳类细胞表达载体上,将两种载体共转染同一哺乳细胞株,在亚硒酸钠存在下用哺乳细胞合成GPX。本发明方法简单,突变体活力和产量高、稳定性好,避免包涵体复性造成的产率下降和失活,从而解决天然GPX来源有限和性质不稳定问题。

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