一种重组腺相关病毒载体生产工艺的建立

    公开(公告)号:CN108330147A

    公开(公告)日:2018-07-27

    申请号:CN201710042618.8

    申请日:2017-01-20

    CPC classification number: C12N15/86 C12N7/00 C12N2750/14143 C12N2750/14151

    Abstract: 本发明属于生物技术领域,具体涉及一种重组腺相关病毒载体生产工艺的建立。本发明首先提供一种重组腺相关病毒载体制备方法,包括如下步骤:(1)将含有重组腺相关病毒载体基因组序列的质粒转染入培养细胞;(2)在合适的条件下培养步骤(1)所得细胞,收集细胞培养上清液,所述细胞培养上清液是指含有重组腺相关病毒载体的细胞和培养上清液的混合物;(3)将步骤(2)所得的细胞培养上清液,进行纯化和浓缩,即得重组腺相关病毒载体。所述制备方法基本适用于大多数rAAV血清型和突变体,生产获得的重组腺相关病毒载体具有高滴度和高纯度,免疫原性低,安全高效的优点。

    从宿主细胞提取和纯化腺相关病毒和腺病毒的方法及其组分和试剂盒

    公开(公告)号:CN108085301A

    公开(公告)日:2018-05-29

    申请号:CN201711129361.6

    申请日:2017-11-15

    Applicant: 贺道耀

    Inventor: 贺道耀

    Abstract: 本发明提供了从含有包装病毒颗粒的宿主细胞的样品中提取和纯化病毒颗粒的三级纯化的方法。三级纯化的方法包括:利用第一次分级分离溶液沉淀并去除大多数的杂质蛋白质;用第二次分级分离溶液沉淀并收集病毒颗粒,去除部分剩余杂质;收集到的病毒颗粒进一步用柱层析去除剩余杂质,得到超纯的病毒溶液。该方法还包括病毒宿主细胞的收集、细胞悬浮和细胞裂解等步骤。这种纯化方法操作简便、方便得到很高回收率的超纯度的病毒溶液、适宜于大量和小量制备,而且所用溶液和操作步骤都不含有对细胞的有毒物质。因此,这一方法展示了一种非常理想的包括腺相关病毒和腺病毒在内的载体病毒的纯化技术。本发明还包括根据上述技术设计出的试剂盒或包装。

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