成纤维细胞生长因子蛋白可溶性高效重组表达的方法

    公开(公告)号:CN109628533A

    公开(公告)日:2019-04-16

    申请号:CN201910046629.2

    申请日:2019-01-18

    CPC classification number: C07K14/50

    Abstract: 本发明公开了成纤维细胞生长因子蛋白可溶性高效重组表达的方法,包括如下步骤:含编码重组成纤维细胞生长因子家族蛋白载体的大肠杆菌菌株,在诱导时通过添加一定剂量单糖能促进胞内活性蛋白的表达。所述成纤维细胞生长因子家族蛋白包括FGF1、FGF2、FGF4、FGF7、FGF8、FGF9、FGF11、FGF15、FGF18、FGF21、FGF23蛋白及其突变体。在诱导时通过添加一定剂量单糖是指在加入诱导剂前补入单糖或与诱导剂同时补入单糖或加入诱导剂后补入单糖。克服了本技术领域关于葡萄糖抑制lac和ara操纵子在大肠杆菌重组的表达的技术偏见,提供一种能够高效促进成纤维细胞生长因子蛋白在大肠杆菌中的表达的方法。

    用于蛋白质聚乙二醇化的添加剂体系

    公开(公告)号:CN108350025A

    公开(公告)日:2018-07-31

    申请号:CN201680067897.7

    申请日:2016-11-22

    CPC classification number: C07K1/1077 A61K47/60 C07K14/50 C07K14/64

    Abstract: 本公开提供了用于蛋白质聚乙二醇化的添加剂体系。所述添加剂体系包含单独使用或与芳族胺如3,5-二氨基苯甲酸或与铵盐如氯化铵或乙酸铵组合使用的对氨基苯甲酰肼。所公开的添加剂组合提供了几个益处,包括增加的反应速率,更高的产率和完成缀合反应所需的氨氧基-PEG当量的减少。典型的反应可以通过将添加剂或添加剂体系与蛋白质溶液和氨氧基-PEG试剂混合来进行。将溶液调节至pH 4并保持在20-25℃而不搅拌直至完成,通常在24小时内完成。

    一种角质细胞生长因子及其分离纯化方法

    公开(公告)号:CN107383183A

    公开(公告)日:2017-11-24

    申请号:CN201710771207.2

    申请日:2017-08-31

    CPC classification number: C07K14/50

    Abstract: 本发明提供了一种角质细胞生长因子及其分离纯化方法,属于蛋白制备领域。该方法采用阳离子交换层析柱与UV检测联用的方式分离菌体匀浆液,菌体为重组人角质细胞生长因子-2工程菌;该分离纯化方法包括:将菌体匀浆液上样至阳离子交换柱,用清洗液冲洗2~3个柱体积后,再用洗脱液冲洗阳离子交换柱,收集在270~290nm处有紫外吸收峰的馏分。利用该方法,仅通过阳离子交换层析柱就可一次性的分离得到纯度大于95%的角质细胞生长因子,纯化过程简单、成本低,可进行放大生产。由该方法制备的角质细胞生长因子,纯度高,可进一步用于制备生物制剂。

    使用FGF23融合多肽的方法和组合物

    公开(公告)号:CN103204941B

    公开(公告)日:2016-05-04

    申请号:CN201310049110.2

    申请日:2011-01-27

    Abstract: 本文公开涉及用于预防或治疗年龄相关疾病的方法、试剂盒和组合物。本文公开的融合多肽包括FGF23或其活性片段。在一种实施方式中融合多肽包含:(a)包含FGF23的多肽或其功能活性变体或衍生物,其中FGF23在位置Q156、C206和C244中的一处或多处具有突变;以及(b)具有减少的对Fc-γ-受体的亲和性和/或增加的血清半寿期的经修饰的Fc片段,或包含Klotho蛋白的至少一个胞外亚结构域的多肽,或其功能活性变体或衍生物;和任选地(c)连接子。Klotho融合蛋白用于治疗和预防多种年龄相关的疾病。在另一实施方式中融合多肽包含FGF或其功能活性变体或衍生物;以及经修饰的Fc片段或其功能活性变体或衍生物。在多种实施方式中FGF23具有减少聚集和蛋白酶介导的切割的突变。

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