公开(公告)号：CN113072626B

公开(公告)日：2023-05-05

申请号：CN202110449837.4

申请日：2021-04-25

申请人： 龙岩学院

发明人： 林炜明 ,  董波 ,  吴思研 ,  章高强 ,  李成钰 ,  魏兰 ,  张晓东

IPC分类号： C07K14/165 ,  C12N15/50 ,  C12N15/70 ,  A61K39/215 ,  A61P31/14

摘要： 本公开提供了一种猫冠状病毒S重组蛋白，其氨基酸序列如SEQ IDNO:1所示。本公开还提供了一种猫冠状病毒S重组蛋白的制备方法，包括如下步骤：(a)以猫冠状病毒S蛋白基因为模板进行PCR扩增，克隆出S重组蛋白片段；(b)将S重组蛋白片段进行电泳分离，回收纯化后连接至载体上，并转化至感受态细胞；(c)将质粒和原核表达载体连接，得到重组质粒。(d)将重组质粒转化至BL21进行原核表达，得到猫冠状病毒S重组蛋白。本发明人首次发现了位于FCoV S2蛋白中的蛋白片段具有良好的反应原性和免疫原性，可作为后续研究和开发FCoV疫苗及相关诊断检测试剂盒的基础。

公开(公告)号：CN113203854B

公开(公告)日：2023-04-28

申请号：CN202110449806.9

申请日：2021-04-25

申请人： 龙岩学院

发明人： 林炜明 ,  董波 ,  章高强 ,  陈雪菲 ,  张晓东 ,  李成钰 ,  魏兰

IPC分类号： G01N33/569 ,  G01N33/58 ,  G01N33/543 ,  C07K14/165 ,  C12N15/50 ,  C12N15/70

摘要： 本公开提供了一种用于检测猫冠状病毒抗体的间接ELISA试剂盒，所述试剂盒中含有包被抗原S重组蛋白；所述S重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本公开还提供了上述试剂盒在猫冠状病毒抗体检测中的应用。本发明人依据间接ELISA的原理，研制了猫冠状病毒抗体的ELISA检测试剂盒，首先，通过筛选抗原性强且保守的猫冠状病毒S2蛋白，扩增和克隆基因；然后构建原核表达载体，原核表达融合蛋白：接着通过Western blotting进行免疫原性分析，将该S重组蛋白进行纯化作为包被抗原，最终获得了灵敏度较高、特异性强、稳定性好的间接ELISA试剂盒。

公开(公告)号：CN113203854A

公开(公告)日：2021-08-03

申请号：CN202110449806.9

申请日：2021-04-25

申请人： 龙岩学院

发明人： 林炜明 ,  董波 ,  章高强 ,  陈雪菲 ,  张晓东 ,  李成钰 ,  魏兰

IPC分类号： G01N33/569 ,  G01N33/58 ,  G01N33/543 ,  C07K14/165 ,  C12N15/50 ,  C12N15/70

摘要： 本公开提供了一种用于检测猫冠状病毒抗体的间接ELISA试剂盒，所述试剂盒中含有包被抗原S重组蛋白；所述S重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本公开还提供了上述试剂盒在猫冠状病毒抗体检测中的应用。本发明人依据间接ELISA的原理，研制了猫冠状病毒抗体的ELISA检测试剂盒，首先，通过筛选抗原性强且保守的猫冠状病毒S2蛋白，扩增和克隆基因；然后构建原核表达载体，原核表达融合蛋白：接着通过Western blotting进行免疫原性分析，将该S重组蛋白进行纯化作为包被抗原，最终获得了灵敏度较高、特异性强、稳定性好的间接ELISA试剂盒。

公开(公告)号：CN117604031A

公开(公告)日：2024-02-27

申请号：CN202310428659.6

申请日：2023-04-20

申请人： 龙岩学院

发明人： 林炜明 ,  张晓东 ,  董波 ,  项明萌 ,  钟晓威 ,  张梅玲

IPC分类号： C12N15/85 ,  C12N15/66 ,  C07K14/165

摘要： 本公开提供了一种猫冠状病毒S蛋白mRNA的体外转录系统及其构建方法，包括如下步骤:对猫冠状病毒S蛋白mRNA序列进行修饰和优化；将设计好的S蛋白基因片段连接体外转录载体，构建pGEM‑S重组质粒，转入大肠杆菌大量培养，并提取质粒进行线性化处理及胶回收，以获得体外转录的DNA模板；通过体外转录反应获得FCoV S mRNA，并进行加帽及纯化。用同样的技术路线构建了pGEM‑EGFP载体，体外转录成EGFP mRNA；以EGFP mRNA作为报告基因进行细胞转染实验，并在体外转染多种细胞系以验证IVT‑mRNA系统。本发明人首次构建了猫冠状病毒S蛋白mRNA的体外转录系统，可以在细胞水平上高效表达目的蛋白，并可以在不同细胞系中应用，为后期制备猫冠状病毒mRNA疫苗提供了基础。

公开(公告)号：CN114019168A

公开(公告)日：2022-02-08

申请号：CN202111282948.7

申请日：2021-11-01

申请人： 龙岩学院

发明人： 张敏 ,  孙艳发 ,  尹会方 ,  范克伟 ,  董波 ,  戴爱玲

IPC分类号： G01N33/577 ,  G01N33/569 ,  G01N33/58 ,  G01N33/558 ,  G01N33/52 ,  C07K16/12 ,  C07K16/06 ,  C07K14/195 ,  C07K1/30 ,  C07K1/22 ,  C12N15/70 ,  C12N15/31

摘要： 本发明公开了一种劳森氏菌免疫胶体检测试纸条的组装方法，劳森氏菌免疫胶体金检测试纸条由兔抗劳森氏菌多克隆抗体、羊抗鼠IgG、鼠抗劳森氏菌LscN单克隆抗体和NC膜制备；用鼠抗劳森氏菌LscN单克隆抗体制备金标探针，用兔抗劳森氏菌多克隆抗体作为检测线，用羊抗鼠IgG作为质控线，用PBS、1％BSA、0.2％Tween‑20、0.05mol/LNaCl溶液封闭NC膜，水洗并干燥；将以上组件组装成劳森氏菌免疫胶体金检测试纸条。本发明具有生产出的试纸条在特异性、敏感性和稳定性方面更加完善，检测更为高效、准确的优点。

公开(公告)号：CN113072626A

公开(公告)日：2021-07-06

申请号：CN202110449837.4

申请日：2021-04-25

申请人： 龙岩学院

发明人： 林炜明 ,  董波 ,  吴思研 ,  章高强 ,  李成钰 ,  魏兰 ,  张晓东

IPC分类号： C07K14/165 ,  C12N15/50 ,  C12N15/70 ,  A61K39/215 ,  A61P31/14

摘要： 本公开提供了一种猫冠状病毒S重组蛋白，其氨基酸序列如SEQ IDNO:1所示。本公开还提供了一种猫冠状病毒S重组蛋白的制备方法，包括如下步骤：(a)以猫冠状病毒S蛋白基因为模板进行PCR扩增，克隆出S重组蛋白片段；(b)将S重组蛋白片段进行电泳分离，回收纯化后连接至载体上，并转化至感受态细胞；(c)将质粒和原核表达载体连接，得到重组质粒。(d)将重组质粒转化至BL21进行原核表达，得到猫冠状病毒S重组蛋白。本发明人首次发现了位于FCoV S2蛋白中的蛋白片段具有良好的反应原性和免疫原性，可作为后续研究和开发FCoV疫苗及相关诊断检测试剂盒的基础。

公开(公告)号：CN108531658A

公开(公告)日：2018-09-14

申请号：CN201810437946.2

申请日：2018-05-09

申请人： 龙岩学院

发明人： 董波 ,  杨小燕 ,  戴爱玲 ,  李晓华

IPC分类号： C12Q1/70 ,  C12Q1/686 ,  C12R1/93

摘要： 本发明公开了一种PEDV和TGEV的二重RT-PCR检测的引物序列，所述PEDV的引物序列为序列1：ATGCTACAATTAGTGAATG，SEQ ID NO:1序列2：TTATACGTCAATAACAGTAC，SEQ ID NO:2；所述TGEV的引物序列序列3：TAGACAAACTCGCTATCGCA，SEQ ID NO:3；序列4:TTCTATCTGGTCGCCATCTT，SEQ ID NO:4；二重RT-PCR检测方法，包括以下步骤：步骤(1)：从猪肠道组织样品中提取总RNA；步骤(2)：将步骤(2)中提取的总RNA反转录为cDNA，以cDNA为模板并采用引物序列进行PCR反应，获得PCR产物；将PCR产物经过琼脂糖胶电泳后，用GeL Doc TMXR紫外凝胶成像系统观察成像并拍照。本发明中通过二重RT-PCR的检测方法，且改变PCR的反应程序，能够快速且精确的检测并分辨出PEDV及TGEV的方法。

公开(公告)号：CN111676320A

公开(公告)日：2020-09-18

申请号：CN202010574784.4

申请日：2020-06-22

申请人： 龙岩学院

发明人： 包银莉 ,  黄翠琴 ,  范克伟 ,  杨小燕 ,  董波

IPC分类号： C12Q1/70 ,  C12Q1/686 ,  C12Q1/6806

摘要： 本发明公开提供了一种猪流行性腹泻病毒S基因全序列扩增方法，包括以下步骤:步骤一、提取病毒RNA；步骤二、cDNA合成；步骤三、PCR扩增；步骤四、基因片段检测及测序。本公开还提供了一种猪流行性腹泻病毒S基因全序列扩增方法的应用，用于对猪流行性腹泻病毒S基因全序列的检测与分析。本公开的扩增方法，无需采用常规多对引物进行拼接的方案，通过设计1对引物即实现了猪流行性腹泻病毒S基因全序列的扩增，不仅操作便捷，还可以避免在高变区域无法扩增获得目的片段的风险。

公开(公告)号：CN118638194A

公开(公告)日：2024-09-13

申请号：CN202410786771.1

申请日：2024-06-18

申请人： 龙岩学院

发明人： 林炜明 ,  董波 ,  钟晓威 ,  李煜民 ,  章烁 ,  戴幸妍 ,  黄秋岚

IPC分类号： C07K14/165 ,  C12N15/50 ,  C12N15/70 ,  G01N33/569 ,  G01N33/543

摘要： 本发明提供了一种猫冠状病毒S蛋白线性抗原表位，所述线性抗原表位的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明还提供了一种猫冠状病毒S蛋白线性抗原表位的筛选方法，包括以下步骤：a)将FCoV S蛋白拆分为具有重叠的三个蛋白片段，即FCoV‑SP1、FCoV‑SP2和FCoV‑SP3；利用原核表达系统对拆分的蛋白片段进行体外表达；对表达成功的蛋白片段进行纯化并鉴定其活性；(b)通过间接ELISA及Western Blot技术筛选蛋白片段；(c)对筛选出的蛋白片段进行氨基酸序列比对和生物信息学分析，确定其为FCoV的线性抗原表位。本发明筛选出的FCoV‑SP3蛋白为FCoV线性抗原表位，具有较高的保守性，可为FCoV疫苗设计提供新的靶点。

公开(公告)号：CN111676320B

公开(公告)日：2023-04-28

申请号：CN202010574784.4

申请日：2020-06-22

申请人： 龙岩学院

发明人： 包银莉 ,  黄翠琴 ,  范克伟 ,  杨小燕 ,  董波

IPC分类号： C12Q1/70 ,  C12Q1/686 ,  C12Q1/6806

摘要： 本发明公开提供了一种猪流行性腹泻病毒S基因全序列扩增方法，包括以下步骤:步骤一、提取病毒RNA；步骤二、cDNA合成；步骤三、PCR扩增；步骤四、基因片段检测及测序。本公开还提供了一种猪流行性腹泻病毒S基因全序列扩增方法的应用，用于对猪流行性腹泻病毒S基因全序列的检测与分析。本公开的扩增方法，无需采用常规多对引物进行拼接的方案，通过设计1对引物即实现了猪流行性腹泻病毒S基因全序列的扩增，不仅操作便捷，还可以避免在高变区域无法扩增获得目的片段的风险。