公开(公告)号：CN113072626B

公开(公告)日：2023-05-05

申请号：CN202110449837.4

申请日：2021-04-25

申请人： 龙岩学院

发明人： 林炜明 ,  董波 ,  吴思研 ,  章高强 ,  李成钰 ,  魏兰 ,  张晓东

IPC分类号： C07K14/165 ,  C12N15/50 ,  C12N15/70 ,  A61K39/215 ,  A61P31/14

摘要： 本公开提供了一种猫冠状病毒S重组蛋白，其氨基酸序列如SEQ IDNO:1所示。本公开还提供了一种猫冠状病毒S重组蛋白的制备方法，包括如下步骤：(a)以猫冠状病毒S蛋白基因为模板进行PCR扩增，克隆出S重组蛋白片段；(b)将S重组蛋白片段进行电泳分离，回收纯化后连接至载体上，并转化至感受态细胞；(c)将质粒和原核表达载体连接，得到重组质粒。(d)将重组质粒转化至BL21进行原核表达，得到猫冠状病毒S重组蛋白。本发明人首次发现了位于FCoV S2蛋白中的蛋白片段具有良好的反应原性和免疫原性，可作为后续研究和开发FCoV疫苗及相关诊断检测试剂盒的基础。

公开(公告)号：CN113072626A

公开(公告)日：2021-07-06

申请号：CN202110449837.4

申请日：2021-04-25

申请人： 龙岩学院

发明人： 林炜明 ,  董波 ,  吴思研 ,  章高强 ,  李成钰 ,  魏兰 ,  张晓东

IPC分类号： C07K14/165 ,  C12N15/50 ,  C12N15/70 ,  A61K39/215 ,  A61P31/14

摘要： 本公开提供了一种猫冠状病毒S重组蛋白，其氨基酸序列如SEQ IDNO:1所示。本公开还提供了一种猫冠状病毒S重组蛋白的制备方法，包括如下步骤：(a)以猫冠状病毒S蛋白基因为模板进行PCR扩增，克隆出S重组蛋白片段；(b)将S重组蛋白片段进行电泳分离，回收纯化后连接至载体上，并转化至感受态细胞；(c)将质粒和原核表达载体连接，得到重组质粒。(d)将重组质粒转化至BL21进行原核表达，得到猫冠状病毒S重组蛋白。本发明人首次发现了位于FCoV S2蛋白中的蛋白片段具有良好的反应原性和免疫原性，可作为后续研究和开发FCoV疫苗及相关诊断检测试剂盒的基础。

公开(公告)号：CN113203854B

公开(公告)日：2023-04-28

申请号：CN202110449806.9

申请日：2021-04-25

申请人： 龙岩学院

发明人： 林炜明 ,  董波 ,  章高强 ,  陈雪菲 ,  张晓东 ,  李成钰 ,  魏兰

IPC分类号： G01N33/569 ,  G01N33/58 ,  G01N33/543 ,  C07K14/165 ,  C12N15/50 ,  C12N15/70

摘要： 本公开提供了一种用于检测猫冠状病毒抗体的间接ELISA试剂盒，所述试剂盒中含有包被抗原S重组蛋白；所述S重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本公开还提供了上述试剂盒在猫冠状病毒抗体检测中的应用。本发明人依据间接ELISA的原理，研制了猫冠状病毒抗体的ELISA检测试剂盒，首先，通过筛选抗原性强且保守的猫冠状病毒S2蛋白，扩增和克隆基因；然后构建原核表达载体，原核表达融合蛋白：接着通过Western blotting进行免疫原性分析，将该S重组蛋白进行纯化作为包被抗原，最终获得了灵敏度较高、特异性强、稳定性好的间接ELISA试剂盒。

公开(公告)号：CN113203854A

公开(公告)日：2021-08-03

申请号：CN202110449806.9

申请日：2021-04-25

申请人： 龙岩学院

发明人： 林炜明 ,  董波 ,  章高强 ,  陈雪菲 ,  张晓东 ,  李成钰 ,  魏兰

IPC分类号： G01N33/569 ,  G01N33/58 ,  G01N33/543 ,  C07K14/165 ,  C12N15/50 ,  C12N15/70

摘要： 本公开提供了一种用于检测猫冠状病毒抗体的间接ELISA试剂盒，所述试剂盒中含有包被抗原S重组蛋白；所述S重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本公开还提供了上述试剂盒在猫冠状病毒抗体检测中的应用。本发明人依据间接ELISA的原理，研制了猫冠状病毒抗体的ELISA检测试剂盒，首先，通过筛选抗原性强且保守的猫冠状病毒S2蛋白，扩增和克隆基因；然后构建原核表达载体，原核表达融合蛋白：接着通过Western blotting进行免疫原性分析，将该S重组蛋白进行纯化作为包被抗原，最终获得了灵敏度较高、特异性强、稳定性好的间接ELISA试剂盒。