公开(公告)号：CN105734679B

公开(公告)日：2018-10-30

申请号：CN201610185978.9

申请日：2016-03-29

Applicant: 重庆市肿瘤研究所

Inventor： 施小龙 ,  唐超 ,  张海伟 ,  李丽仙 ,  辇伟奇

IPC: C40B50/06 ,  C12Q1/6869

Abstract: 本发明公开了核酸靶序列捕获测序文库的制备方法；a)根据目标靶序列设计并合成捕获探针A和B溶液；b)在待测DNA或RNA样品中加入探针A溶液，同时加入DNA聚合酶或逆转录酶、dNTP和含Mg2+的缓冲液,延伸探针A；c)再加入链霉亲合素包被的磁珠与探针A结合并洗涤磁珠；d)在含有磁珠的缓冲液中再添加探针B溶液；e)在缓冲液中加入DNA聚合酶、dNTP和含Mg2+的缓冲液延伸探针B；f)洗涤磁珠，通过加热变性使捕获探针B延伸产物从磁珠上解离洗脱下来；g)以捕获探针B延伸产物为模板，用公共引物a和b进行文库PCR扩增，本发明具有高通量、高特异性、高灵敏度、操作方便、操作成本低、适用范围广。

公开(公告)号：CN105734679A

公开(公告)日：2016-07-06

申请号：CN201610185978.9

申请日：2016-03-29

Applicant: 重庆市肿瘤研究所

Inventor： 施小龙 ,  唐超 ,  张海伟 ,  李丽仙 ,  辇伟奇

IPC: C40B50/06 ,  C12Q1/68

Abstract: 本发明公开了核酸靶序列捕获测序文库的制备方法；a)根据目标靶序列设计并合成捕获探针A和B溶液；b)在待测DNA或RNA样品中加入探针A溶液，同时加入DNA聚合酶或逆转录酶、dNTP和含Mg2+的缓冲液,延伸探针A；c)再加入链霉亲合素包被的磁珠与探针A结合并洗涤磁珠；d)在含有磁珠的缓冲液中再添加探针B溶液；e)在缓冲液中加入DNA聚合酶、dNTP和含Mg2+的缓冲液延伸探针B；f)洗涤磁珠，通过加热变性使捕获探针B延伸产物从磁珠上解离洗脱下来；g)以捕获探针B延伸产物为模板，用公共引物a和b进行文库PCR扩增，本发明具有高通量、高特异性、高灵敏度、操作方便、操作成本低、适用范围广。

公开(公告)号：CN108396057B

公开(公告)日：2021-11-09

申请号：CN201810168991.2

申请日：2018-02-28

Applicant: 重庆市肿瘤研究所

Inventor： 施小龙 ,  唐超 ,  王颖 ,  吴永忠

IPC: C12Q1/6806 ,  C12Q1/6869 ,  C40B50/06

Abstract: 本发明公开了一种基于长链分子倒置探针的核酸靶向捕获测序文库制备方法；a)合成捕获探针A，捕获探针B以及连接子C；b)在连接酶反应体系里加入磷酸化的探针A，B以及连接子C，同时加入DNA连接酶，使A和B在C的桥接作用下连接；c)合并多个针对不同靶区的连接混合物，通过变性电泳或核酸纯化试剂盒分离和纯化连接的产物，得到长链分子倒置探针；d)长链分子倒置探针与待测的样品的DNA或cDNA混合，杂交，在缓冲液中加入DNA聚合酶、DNA连接酶、dNTP和含Mg2+的缓冲液延伸长链分子倒置探针，在DNA连接酶的作用下形成闭合的分子；e)加入核酸外切酶降解没有环化的DNA分子；f)用和长链分子倒置探针的公共序列区域对应的引物进行PCR扩增，得到靶向区域的测序文库。

公开(公告)号：CN108396057A

公开(公告)日：2018-08-14

申请号：CN201810168991.2

申请日：2018-02-28

Applicant: 重庆市肿瘤研究所

Inventor： 施小龙 ,  唐超 ,  王颖 ,  吴永忠

IPC: C12Q1/6806 ,  C12Q1/6869 ,  C40B50/06

Abstract: 本发明公开了一种基于长链分子倒置探针的核酸靶向捕获测序文库制备方法；a)合成捕获探针A，捕获探针B以及连接子C；b)在连接酶反应体系里加入磷酸化的探针A，B以及连接子C，同时加入DNA连接酶，使A和B在C的桥接作用下连接；c)合并多个针对不同靶区的连接混合物，通过变性电泳或核酸纯化试剂盒分离和纯化连接的产物，得到长链分子倒置探针；d)长链分子倒置探针与待测的样品的DNA或cDNA混合，杂交，在缓冲液中加入DNA聚合酶、DNA连接酶、dNTP和含Mg2+的缓冲液延伸长链分子倒置探针，在DNA连接酶的作用下形成闭合的分子；e)加入核酸外切酶降解没有环化的DNA分子；f)用和长链分子倒置探针的公共序列区域对应的引物进行PCR扩增，得到靶向区域的测序文库。