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公开(公告)号：CN113265345A
公开(公告)日：2021-08-17
申请号：CN202110559185.X
申请日：2021-05-21
申请人： 辽宁大学
摘要： 本发明涉及一株纳豆激酶真核高效表达双启动子系统重组基因工程菌及其构建方法和应用。以pGAPZα‑A质粒为模板PCR扩增获得启动子GAP基因片段；将扩增的启动子GAP基因片段通过双酶切后，连接到pGAPZα‑A‑NKt2上，构建pGAPZα‑A‑GAP‑GAP‑NKt2重组载体；将pGAPZα‑A‑GAP‑GAP‑NKt2重组载体通过电转化毕赤酵母X33中，获得双启动子系统重组基因工程菌LNF013。本发明成功构建双启动子毕赤酵母真核体系表达的纳豆激酶重组基因工程菌，纳豆激酶表达量及酶活性显著提高，为今后纳豆激酶大规模的应用奠定了基础。
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公开(公告)号：CN113265345B
公开(公告)日：2023-07-28
申请号：CN202110559185.X
申请日：2021-05-21
申请人： 辽宁大学
摘要： 本发明涉及一株纳豆激酶真核高效表达双启动子系统重组基因工程菌及其构建方法和应用。以pGAPZα‑A质粒为模板PCR扩增获得启动子GAP基因片段；将扩增的启动子GAP基因片段通过双酶切后，连接到pGAPZα‑A‑NKt2上，构建pGAPZα‑A‑GAP‑GAP‑NKt2重组载体；将pGAPZα‑A‑GAP‑GAP‑NKt2重组载体通过电转化毕赤酵母X33中，获得双启动子系统重组基因工程菌LNF013。本发明成功构建双启动子毕赤酵母真核体系表达的纳豆激酶重组基因工程菌，纳豆激酶表达量及酶活性显著提高，为今后纳豆激酶大规模的应用奠定了基础。
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公开(公告)号：CN114806990A
公开(公告)日：2022-07-29
申请号：CN202210507662.2
申请日：2022-05-11
申请人： 辽宁大学
摘要： 本发明公开一种耐热性纳豆激酶重组基因工程菌及其构建方法和应用。基于模拟计算方法筛选到了纳豆激酶蛋白Y256P突变位点，构建含有突变位点的PGEX‑6P‑NKY256P重组质粒载体，并将其转入大肠杆菌BL21中进行表达，获得重组基因工程菌LNUB571。本发明成功构建耐热性纳豆激酶重组基因工程菌，纳豆激酶热稳定性显著提高，为今后纳豆激酶工业化生产及大规模应用奠定了基础。
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公开(公告)号：CN114806990B
公开(公告)日：2023-05-30
申请号：CN202210507662.2
申请日：2022-05-11
申请人： 辽宁大学
摘要： 本发明公开一种耐热性纳豆激酶重组基因工程菌及其构建方法和应用。基于模拟计算方法筛选到了纳豆激酶蛋白Y256P突变位点，构建含有突变位点的PGEX‑6P‑NKY256P重组质粒载体，并将其转入大肠杆菌BL21中进行表达，获得重组基因工程菌LNUB571。本发明成功构建耐热性纳豆激酶重组基因工程菌，纳豆激酶热稳定性显著提高，为今后纳豆激酶工业化生产及大规模应用奠定了基础。
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