可同时定量全基因组5-甲基胞嘧啶和5-羟甲基胞嘧啶的分析方法

    公开(公告)号:CN118853835A

    公开(公告)日:2024-10-29

    申请号:CN202411029233.4

    申请日:2024-07-30

    Applicant: 贵州大学

    Abstract: 本发明公开了一种可同时定量全基因组5‑甲基胞嘧啶和5‑羟甲基胞嘧啶的分析方法,包括如下步骤:从生物样品中提取DNA,合成含有内剪切酶识别序列的发夹探针;将提取的DNA经过氧化、重亚硫酸盐处理或只经过重亚硫酸盐处理;将非甲基化DNA经过重亚硫酸盐处理,作为非甲基化组;配置一系列不同比例的甲基化组;将甲基化组和非甲基化组与发夹探针杂交,再加入连接酶连接,然后经延伸、剪切、扩增,并带入荧光基团;计算甲基化组与未甲基化组荧光强度的差值,建立检测标准曲线;将该检测标准曲线用于检测待测样品的甲基化修饰水平。本发明能够在温和条件下即可实现全基因组DNA 5mC和5hmC简单、快速、灵敏的检测目的。

    基于滚环扩增信号放大的甲基化修饰定量分析方法

    公开(公告)号:CN118291595A

    公开(公告)日:2024-07-05

    申请号:CN202410601316.X

    申请日:2024-05-15

    Applicant: 贵州大学

    Abstract: 本发明公开了一种基于滚环扩增信号放大的甲基化修饰定量分析方法,包括如下步骤:设计合成包含正常腺嘌呤的核苷酸探针A、甲基化修饰腺嘌呤的核苷酸探针A'以及一段磷酸化的锁式探针P;分别配置一系列由不同比例的核苷酸探针A、核苷酸探针A'组成的混合标准品,并加入锁式探针,得到甲基化组;配置含有核苷酸探针A和锁式探针的非甲基化组;将甲基化组和非甲基化组分别进行滚环扩增,再进行荧光检测;建立检测标准曲线;将检测标准曲线用于检测待测样品的RNA甲基化修饰水平。本发明无需复杂的样品前处理步骤和昂贵大型仪器,可避免复杂操作及检测位点的丢失,在温和条件下即可实现实际样品RNA的m6A简单、快速、灵敏的检测目的。

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